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  • 大鼠核因子?b(NF?b)酶联免疫分析(ELISA)

    中国教育装备采购网2010-09-06 10:03围观27次我要分享我要投稿

    大鼠核因子?b(NF?b)酶联免疫分析(ELISA)

    试剂盒使用说明书

    本试剂盒仅供研究使用。

    药品名称:

    通用名:大鼠核因子?b (NF?b)酶联免疫分析试剂盒

    使用目的:

    本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、或相关组织液中核因子?b (NF?b)的含量。

    实验原理

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠核因子?b 水平。用纯化的大鼠核因子?b抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入核因子?b,再与HRP标记的核因子?b抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的核因子?b呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠核因子?b (NF?b)的含量。

    试剂盒组成

    1

    20倍浓缩洗涤液

    30ml×1瓶

    7

    终止液

    6ml×1瓶

    2

    酶标试剂

    6ml×1瓶

    8

    标准品(1350ng/L)

    0.5ml×1瓶

    3

    酶标包被板

    12孔×8条

    9

    标准品稀释液

    1.5ml×1瓶

    4

    样品稀释液

    6ml×1瓶

    10

    说明书

    1份

    5

    显色剂A液

    6ml×1瓶

    11

    封板膜

    2张 

    6

    显色剂B液

    6ml×1/瓶

    12

    密封袋

    1个

    标本处理及要求

    1.血清、血浆标本可直接测定;

    2.尿液、脑脊液、腹腔液:2000-3000转/分离心10分钟后,取上清液待测。

    3.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    4.采集后尽早进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

    操作步骤

    1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上按序设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;再各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后,在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉;再各取50μl分别加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。( 稀释后各孔加样量都为50μl,浓 度分别为 900 ng/L,600ng/L ,300 ng/L,150 ng/L,75 ng/L)。

    加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样

    1.         品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,轻轻晃动混匀。

    2.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

    3.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

    4.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

    5.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

    6.         温育:操作同3。

    7.         洗涤:操作同5。

    8.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

    9.         终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    10.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

     

    计算

      以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

    注意事项

    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

    3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

    4.  请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔OD值的),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

    5.  严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

    6.本试剂不同批号组分不得混用。

    7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9.底物请避光保存。

    检测范围:

    50 ng/L -1000 ng/L

    规格:

    96人份/盒

    保存条件及有效期

    1.试剂盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6个月

     

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