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  • 小鼠免疫球蛋白E(IgE)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒

    中国教育装备采购网2010-09-06 09:02围观142次我要分享我要投稿

    小鼠免疫球蛋白E(IgE)酶联免疫分析(ELISA)
    试剂盒使用说明书
    本试剂盒仅供研究使用。
    药品名称:
    通用名:小鼠免疫球蛋白E(IgE)酶联免疫分析试剂盒
    使用目的:
    本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、或其它组织液中免疫球蛋白E(IgE)含量。
    实验原理
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠免疫球蛋白E(IgE)水平。用纯化的IgE 抗
    体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入小鼠免疫球蛋白E(IgE),再
    与HRP 标记的羊抗小鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底
    物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
    颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白E 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD
    值),通过标准曲线计算样品中小鼠免疫球蛋白E(IgE)浓度。
    试剂盒组成
    1 25 倍浓缩洗涤液30ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
    2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品(540 μg/ml) 0.5ml×1 瓶
    3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
    4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
    5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
    6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
    标本要求
    1.标本采集后尽早进行实验。
    2.待检血清1:200 稀释:具体为在试管中先按1:20 稀释待检血清(190μl 样品稀释
    液中加10μl 待检血清,混匀),再按1:10 稀释待检血清(取10μl1:20 稀释的
    待检血清加90μl 的样品稀释液,混匀即可)
    3.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    4.可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
    操作步骤
    1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在第一、第二孔中分别加标
    准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二
    孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,
    混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉,再各取50μl 分别加到第五、第六孔
    中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各
    取50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混
    匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准
    品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,
    浓度分别为(360 μg/ml,240μg/ml ,120μg/ml,60μg/ml, 30μg/ml)。
    2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
    品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样
    品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混
    匀。
    3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
    4. 配液:将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用
    5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
    重复5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
    7. 温育:操作同3。
    8. 洗涤:操作同5。
    9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
    15 分钟.
    10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止
    液后15 分钟以内进行。
    计算
    以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
    OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标
    准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
    即为样品的实际浓度。
    注意事项
    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
    用完,板条应装入密封袋中保存。
    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
    3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
    控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
    4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
    大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
    算时请最后乘以总稀释倍数(×n×1000)。
    5. 严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准
    6.底物请避光保存。
    7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
    9.本试剂不同批号组分不得混用。
    10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
    检测范围:
    20μg/ml-400μg/ml
    规格:
    96 人份/盒
    保存条件及有效期
    1.试剂盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6 个月

    上海逸峰生物公司长期经营Elisa试剂盒、免疫组化试剂盒、细胞、耗材、 抗体。公司免费提供代检测服务。详情请来电咨询或咨询在线人员。

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