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  • 大鼠Na-K-ATP酶Elisa试剂盒说明书

    中国教育装备采购网2010-09-07 10:34围观68次我要分享

    本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。

     

    大鼠Na-K-ATP酶定量检测试剂盒(ELISA

    使用说明书

                                                                                                                                

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒试剂盒名称】

    大鼠Na-K-ATP酶定量检测试剂盒(ELISA)

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒试剂盒用途】

    定量检测大鼠血清、血浆及相关组织样本中Na-K-ATP酶的含量。

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒检测原理】

    本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠Na-K-ATP酶单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中大鼠Na-K-ATP酶浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中大鼠Na-K-ATP酶含量。

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒试剂盒组成】

    1

    酶标包被板

    12孔×8条

    7

    显色剂A液

    6mL

    2

    标准品

    0.3mL×6管

    8

    显色剂B液

    6mL

    3

    20倍浓缩洗涤液

    25mL

    9

    终止液

    6mL

    4

    样本稀释液

    6mL

    10

    说明书

    1份

    5

    特殊稀释液

    6mL

    11

    封板膜

    2张

    6

    酶标试剂

    6mL

    12

    密封袋

    1个

    备注:标准品(1号→6号)浓度依次为:16、8、4、2、1、0.5 μmol/g

     

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材】

    1、37℃恒温箱

    2、标准规格酶标仪

    3、精密移液器及一次性吸头

    4、蒸馏水

    5、一次性试管

    6、吸水纸

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒操作步骤】

    1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。

    2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

    3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

    4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

    5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

    6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。

    7、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

    8、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

    9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s),37℃避光显色15min。

    10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

    11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

    12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒样本要求】

    1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

    2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

    3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒注意事项】

    1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

    2、酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

    3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。

    4、牢记样本已经稀释5倍,计算结果乘以5才是样本实际浓度。

    5、本试剂盒定量范围为0.5-16μmol/g,超过此范围,为标准曲线延伸计算所得,不做为准确定量结果,请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(0.5-16μmol/g范围内),乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。

    6、若显色过浅,可适当延长底物温育时间。

    7、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。

    8、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。

    9、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

     

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒操作程序总结】

     

    准备试剂,样品和标准品

     

     

    加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟

     

    洗板4次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟

     

    洗板4次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟

     

    加入终止液

     

    15分钟之内读OD值

     

    计算

     

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒检测范围】

    0.5μmol/g - 16μmol/g

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒规格】

    96人份/盒

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒贮藏】

    2-8℃,避光防潮保存。

    【大鼠Na-K-ATPElisa试剂盒有效期】

    6个月

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