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  • 大鼠单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

    中国教育装备采购网 2011/4/13 13:23:42 围观100次 我要分享

     

    本试剂盒仅供研究使用。

    检测范围:                                                          96T

    20ng/L-600ng/L

     

    使用目的:

    本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)含量。

    实验原理

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠胃动素(MTL)水平。用纯化的大鼠单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加大鼠单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1),再与HRP标记的单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)浓度。

    试剂盒组成

    1

    30倍浓缩洗涤液

    20ml×1瓶

    7

    终止液

    6ml×1瓶

    2

    酶标试剂

    6ml×1瓶

    8

    标准品(1200ng/L)

    0.5ml×1瓶

    3

    酶标包被板

    12孔×8条

    9

    标准品稀释液

    1.5ml×1瓶

    4

    样品稀释液

    6ml×1瓶

    10

    说明书

    1份

    5

    显色剂A液

    6ml×1瓶

    11

    封板膜

    2张 

    6

    显色剂B液

    6ml×1/瓶

    12

    密封袋

    1个

    标本要求

    1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

    2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步骤

    1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

    600ng/L

    5号标准品

    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

    300ng/L

    4号标准品

    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

    150ng/L

    3号标准品

    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

    75ng/L

    2号标准品

    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

    37.5ng/L

    1号标准品

    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

     

     

    2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

    3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

    4.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

    5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

    6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

    7.         温育:操作同3。

    8.         洗涤:操作同5。

    9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

    10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    操作程序总结:

    1.准备试剂,样品和标准品

    2.加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟

    3.洗板5次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟

    4.洗板5次,加入显色液A、B,37℃反应10分钟

    5.加入终止液

    6.15分钟之内度OD值

    7.计算

    计算

      以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

    注意事项

    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

    3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

    4.  请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

    5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物请避光保存。

    7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9.本试剂不同批号组分不得混用。

    10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

    保存条件及有效期

    1.试剂盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6个月

     

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