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  • 小鼠水通道蛋白1(AQP1)ELISA试剂盒说明书

    中国教育装备采购网 2011/7/4 8:56:33 围观39次 我要分享

    小鼠水通道蛋白1(AQP1)ELISA试剂盒说明书
    本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相
    关液体样本中水通道蛋白1(AQP1)的含量。
    实验原理:
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠水通道蛋白 1(AQP1)水平。用纯化的小鼠水通道蛋白 1(AQP1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入水通道蛋白 1(AQP1),再与 HRP标记的 AQP1抗体结合,形成抗体 -抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的水通道蛋白 1(AQP1)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度( OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠水通道蛋白 1(AQP1)浓度。
    试剂盒组成:

    试剂盒组成
          48孔配置
    96孔配置
    保存
    说明书
    1份
    1份
     
    封板膜
    2片(48)
    2片(96)
     
    密封袋
    1个
    1个
     
    酶标包被板
    1×48
    1×96
    2-8℃保存
    标准品:9000ng/L
    0.5ml×1瓶
    0.5ml×1瓶
    2-8℃保存
    标准品稀释液
    1.5ml×1瓶
    1.5ml×1瓶
    2-8℃保存
    酶标试剂
    3 ml×1瓶
    6 ml×1瓶
    2-8℃保存
    样品稀释液
    3 ml×1瓶
    6 ml×1瓶
    2-8℃保存
    显色剂A液
    3 ml×1瓶
    6 ml×1瓶
    2-8℃保存
    显色剂B液
    3 ml×1瓶
    6 ml×1瓶
    2-8℃保存
    终止液
    3ml×1瓶
    6ml×1瓶
    2-8℃保存
    浓缩洗涤液
    (20ml×20倍)×1瓶
    (20ml×30倍)×1瓶
    2-8℃保存
     
    样本处理及要求:
    1. 血清:室温血液自然凝固 10-20分钟,离心 20分钟左右( 2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
    2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20分钟后,离心 20分钟左右( 2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
    3. 尿液:用无菌管收集,离心 20分钟左右( 2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
    4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20分钟左右( 2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
    6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20℃保存,但应避免反复冻融 .
    7. 不能检测含 NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。
    操作步骤:
    1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10孔,在第一、第二孔中分别加标准品 100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取 100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl弃掉,再各取 50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取 50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50μl,浓度分别为 3μg/L,2μg/L,1μg/L,0.5μg/L,0.25μg/L。
    2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
    3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。
    4.配液:将 30(48T的 20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T的 20倍)倍稀释后备用。
    5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。
    6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
    7.温育:操作同 3。
    8.洗涤:操作同 5。
    9.显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀, 37℃避光显色15分钟.
    10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    11.测定:以空白空调零, 450nm波长依序测量各孔的吸光度( OD值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
    注意事项:
    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
    3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
    控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
    4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物请避光保存。
    7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .
    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
    9.本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
     
    计算:以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。试剂盒性能:
    1.     样品线性回归与预期浓度相关系数 R值为 0.990以上。
    2.     批内与批见应分别小于 9%和 11%
     
    检测范围:
    0.1μg/L -4μg/L
    保存条件及有效期:
    1           2-8℃。
    2           6个月
     
    2018南京展
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