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  • 人副流感病毒(HPIV)ELISA试剂盒说明书

    中国教育装备采购网 2011/7/18 10:35:24 围观155次 我要分享

    人副流感病毒(HPIV)ELISA试剂盒说明书
    本试剂盒仅供研究使用。
    药品名称:
    通用名:人副流感病毒(HPIV)抗原酶联免疫诊断试剂盒
    使用目的:
    本试剂盒定性测定人血液、或其它相关组织中副流感病毒(HPIV)抗原
    实验原理:
    本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中人副流感病毒(HPIV)。用纯化的人副流感病毒(HPIV)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中人副流感病毒(HPIV)抗原相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的羊抗人抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中人副流感病毒(HPIV)抗原的存在与否。
    试剂盒组成:

     

    1
    20倍浓缩洗涤液
    50ml×1瓶
    7
    终止液
    6ml×1瓶
    2
    酶标试剂
    6ml×1/瓶
    8
    标准品(阳性对照)
    0.5ml×1瓶
    3
    酶标包被板
    12孔×8条
    9
    标准品稀释液(阴性对照)
    0.5ml×1瓶
    4
    样品稀释液
    6ml×1瓶
    10
    说明书
    1份
    5
    显色剂A液
    6ml×1瓶
    11
    封板膜
    2张 
    6
    显色剂B液
    6ml×1瓶
    12
    密封袋
    1个

     

    标本要求:
    1.标本处理:(1)血清、血浆标本:可直接检测
    (2)组织标本;用棉签擦拭黏膜后,将棉签浸入1ml生理盐水中,浸泡10分钟后,离心取上清液备用;或按相关文献制备。
    2.标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测,可将标本在-20℃保存一个月,但应避免反复冻融。
    3.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步骤:
    1.         编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
    2.         加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照(标准品)50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
    3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
    4.         配液:将20倍浓缩洗涤液加蒸馏水至1000ml后备用
    5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
    6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl(或一滴),空白孔除外。
    7.         温育:操作同3。
    8.         洗涤:操作同5。
    9.         显色:每孔先加入显色剂A 50μl(或一滴),再加入显色剂B 50μl(或一滴),轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟
    10.     终止:每孔加终止液50μl(或一滴),终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
     
    结果判定:
      试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.15
     临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.30
     阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为人副流感病毒(HPIV)抗原阴性
     阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为人副流感病毒(HPIV)抗原阳性
    注意事项
    1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
    2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
    3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
    4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    5.底物请避光保存。
    6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm
    7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。
    规格:
         96人份/盒
    保存条件及有效期
    1.试剂盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6个月
    第四届全国学校体育与卫生器材装备展示会
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