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  • 人碱性成纤维细胞生长因子23(bFGF23)ELISA检测试剂盒

    中国教育装备采购网2011-10-27 13:30围观5次我要分享

    本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断

    人碱性成纤维细胞生长因子23(bFGF23)ELISA检测试剂盒

    使用说明书

    检测原理

    试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人碱性成纤维细胞生长因子23(bFGF23)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人碱性成纤维细胞生长因子23(bFGF23)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

    样品收集、处理及保存方法

    1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

    2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

    3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

    4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

    5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

    自备物品

    1.     酶标仪(450nm)

    2.     高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

    3.     37℃恒温箱

    操作注意事项

    1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

    2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

    3.  标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。

    4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

    5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

    试剂盒组成

    名称

    96孔配置

    48孔配置

    备注

    微孔酶标板

    12孔×8条

    12孔×4条

    标准品(16 pg/mL)

    0.6mL

    0.6mL

    按说明书进行稀释

    标准品稀释液

    6mL

    3mL

    样本稀释液

    6mL

    3mL

    检测抗体-HRP

    10mL

    5mL

    20×洗涤缓冲液

    25mL

    15mL

    按说明书进行稀释

    底物A

    6mL

    3mL

    底物B

    6mL

    3mL

    终止液

    6mL

    3mL

    封板膜

    2张

    2张

    说明书

    1份

    1份

    自封袋

    1个

    1个

    注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:16、8、4、2、1、0.5 pg/mL.

    试剂的准备

     20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

    洗板方法

    1.  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

    2.  自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

    操作步骤

    1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

    2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

    3.  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;

    4.  随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

    5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

    6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

    结果判断

     绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

     

    试剂盒性能

    1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

    2.  灵敏度:最低检测浓度小于0.1 pg/mL。

    3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

    4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

    5.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

    6.  有效期:6个月

    免责声明

    1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

    2.   严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

     

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