人软骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA试剂盒_中国教育装备采购网
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    中国教育装备采购网 2011/12/8 11:13:24 围观27次 我要分享

    人软骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA试剂盒说明书人软骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人软骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被软骨糖蛋白39(HCgp-39)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的软骨糖蛋白39(HCgp-39)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法:1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品:1.37℃恒温箱2.酶标仪(450nm)3.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL操作注意事项:1.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。2.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。3.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。4.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。人软骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA试剂盒组成:名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2 张2 张无说明书1 份1 份无自封袋1 个1 个无注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、5、10、20、40、80 ng/mL试剂的准备:20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法:1.自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。2.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。操作步骤:1.从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL,15min 内,在450nm 波长处测定各孔的OD值。结果判断:绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能:1.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。2.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值,大于等于0.9900。3.灵敏度:最低检测浓度小于1.0 ng/mL。4.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。5.贮藏:2-8℃,避光防潮保存。6.有效期:6个月
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