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  • 基于细胞物理性状的免疫细胞分离方法

    中国教育装备采购网 2012/4/7 16:48:29 围观126次 我要分享

    1、根据各种细胞比重的差异
    (1)自然沉降法
    (2)密度梯度离心法
        ①Ficoll-Hypaque密度梯度离心法:人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞,其体积、形状和比重与其他细胞不同,红细胞和多核白细胞比重较大,为1.092左右,而淋巴细胞和单个核细胞比重为1.075左右。利用密度在1.077±0.001g/L之间近于等渗的Ficoll-Hypaque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时,各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集。血浆和血小板由于密度较低,故悬浮于分层液的上部;红细胞与粒细胞由于密度较大,故沉于分层液的底部;PBMC密度稍低于分层液,故位于分层液界面上,这样就可获得PBMC。
        ②Percoll密度梯度离心法:Percoll是Pharmacia公司的商品名,成分为硅化聚乙烯吡咯烷酮(PVP),为无毒,无刺激的新型密度梯度离心分离剂。聚乙烯吡咯酮包被的硅胶混悬液,它具有易成等渗、粘度低、无毒性、不引起细胞聚集等优点,已得到广泛引用。由于Percoll在培养基中颗粒大小不等,其在离心过程中自然形成密度梯度,从而将不同密度的细胞分离出来。将1份10×PBS与9份percoll储存液混合,制成等渗Percoll悬液,此悬液被认为是100 % Percoll悬液,其密度为1.1294g/ml,可通过用PBS(1x)或组织培养液稀释此100%Percoll而获得适宜密度进行细胞分离,因为稀释度与密度线性相关,常用的密度如下:
          70%             Percoll            1.090g/ml  
          60%             Percoll            1.077g/ml
          50%             Percoll            1.067g/ml
          40%             Percoll            1.056g/ml
          30%             Percoll            1.043g/ml
          20%             Percoll            1.031g/ml
    (3)改变细胞密度法
        巨噬细胞能够吞噬铁粉,增加其比重,通过密度梯度离心或磁场将其分离;T细胞能够与绵羊红细胞形成花环,形成的花环复合物比重大,借助密度梯度离心将T细胞分离。
     
    2、根据细胞粘附特性
        巨噬细胞能够非特异性粘附于玻璃或塑料表面,根据这种特性可以将巨噬细胞从混合细胞群体中分离;B细胞能够粘附于尼龙棉上,通过尼龙棉柱时被阻滞,从而将其与其他细胞分开。
     
    3、根据细胞对渗透压变化的敏感度
        例如红细胞对低渗敏感,通过低渗处理能够裂解红细胞。

     

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