猪繁殖与呼吸综合征病原检测方法

中国教育装备采购网2012-05-03 09:03围观124次我要分享

猪繁殖与呼吸综合征病原检测

  诊断时最重要的步骤是选择合适的样品,这样才能获得有用的实验室资料。一般来讲,最好从幼猪而非大猪中采集样品,因为在幼猪中的PRRSV的数量多,持续时间长。感染后4—6周能从乳猪、断奶仔猪或架子猪的血清中分离血清。病毒分离用的样品在采集后迅速冷藏或冻贮,因为PRRSV对病毒很敏感,在运输过程中必须注意温度不能升高,否则PRRSV易被灭活而不能进行病毒分离。此外,病毒对pH的稳定性范围很小,因此必须保证无菌环境,以避免细菌污染而导致pH改变。样品必须用绝缘和防漏的容器包装,有足够的冷冻剂,迅速递送到相关实验室对PRRS的病毒学诊断比较困难,这主要由于分离病毒需要选用猪肺泡巨噬细胞,这种细胞来自6~8周龄的猪,并且最好是无特定病原体猪(SPF)这种猪不是所有实验室都可以方便得到的。一般的传代细胞系对该病毒的易感性差,不能完全替代肺泡巨噬细胞。某些猴肾细胞系(MARC-145)能较好的替代巨噬细胞,但不支持所有的分离物,尤其是对欧洲型毒株。

  鉴定PRRSV的实验室技术还有免疫组化和免疫荧光方法,其中以肺和扁桃体组织用于检测效果较好,这两种方法比用病毒分离方法更迅速且无需细胞培养设施。免疫组化法可以对用福尔马林固定的组织块病毒鉴定,并能对病毒进行溯源性分析,但这两种方法的正确性受操作人员的技巧影响很大,最好再经病毒分离或PCR鉴定应用原位杂交法能检测和区别PRRS病毒北美洲基因型及欧洲株基因型,但它主要用于研究,并不适于实验室诊断。

  反转录—聚合酶联反应(RT—PCR)以及套式PCR法检测病毒RNA的敏感性很高,当病毒分离困难时很有用,如测定精液或病毒因为自溶而部分降解。在猪的急性感染中,PCR与常规病毒分离同等敏感,在感染的康复阶段比病毒分离更为敏感。自动化的PCR试验不易发生污染,为诊断实验室提供敏感而特异的试验,而且费用大为下降。现在已广泛用于包括血清在内的多种组织的检测;现已发展了多种PCR诊断技术,其中嵌套式PCR比普通PCR提供了更高的敏感性,多重PCR可以用于区别北美型和欧洲型PRRS病毒分离株;现在更新的荧光定量RT—PCR技术也已经用于组织或血清样本中PRRSV的定性和定量检测。通过这些分子生物学的方法,我们可以在难以进行病毒分离的情况下快速准确地检测病原。最近,开发的PCR产物进行限制性片段长度多态性分析的方法,可用于PRRS野毒株以及疫苗分离株的分子流行病学检测。

来源:上海亨代劳生物仪器有限公司作者:上海亨代劳生物仪器有限公司

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