一基实业胰蛋白酶解离法检测HBsAg-CIC

中国教育装备采购网2012-05-15 09:20围观165次我要分享

  用3.5%PEG选择性地沉淀血清中CIC,继之用胰蛋白酶消化沉淀物中的抗体蛋白,分离出抗原部分,用反向间接血凝法测定HBsAg滴度。与不加胰蛋白酶的对照管比较,如HBsAg滴度升高,则说明有HBsAg-CIC的存在。

  1.试剂

  ①pH8.4硼酸盐缓冲液(BBS):配制法同第一节中PEG沉淀试验;

  ②7%PEG及3.5%PEG溶液:用BBS配制;

  ③10mg/mL胰蛋白酶溶液:用pH8.2巴比妥缓冲液配制。

  2.操作步骤

  (1)在测定管与对照管内务加待测血清0.2mL。

  (2)两管各加pH8.4BBSl.8mL,将血清作1:10稀释。

  (3)各加7%PEG 2mL,充分混匀后,4~C冰箱放置18h。

  (4)在10%左右条件下2 500r/min离心20min,弃上清

  (5)将沉淀物悬浮于4mL 3.5%PEG溶液中,2 500r/rain离心20min,弃上清。

  (6)于测定管中加入0.2mL胰蛋白酶溶液,对照管加0.2mLBBS,混匀后置37%水浴30rain,其间振荡3—4次。取出后,立即置56%水浴5min。

  (7)将测定管、对照管及未经处理的血清分别作系列倍比稀释,用反向间接血凝试验检测HBsAg滴度。

  3.结果判断

  ①测定管HBsAg滴度在1/16以上,且滴度高于对照管1个稀释度以上者为HBsAg-CIC阳性;

  ②测定管与对照管HBsAg滴度相同,但其滴度高于血清游离HBsAg1个稀释度以上者也为HBsAg-CIC阳性。

  4.临床意义

        胰蛋白酶解离法检测HBs-Ag-CIC简便而敏感,有助于确定乙肝病程中有无抗原特异性复合物形成,估计是否有可能形成肝外系统病变。

来源:上海一基实业有限公司作者:上海一基实业有限公司

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