植物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

中国教育装备采购网2012-10-18 09:30围观1778次我要分享

  

植物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)酶联免疫分析(ELISA)

 

  植物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)酶联免疫分析(ELISA)

  试剂盒使用说明书

  本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中β-葡萄糖苷酸酶(GUS)含量。

  实验原理:

  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)水平。用纯化的植物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)抗原,再与HRP标记的β-葡萄糖苷酸酶(GUS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β-葡萄糖苷酸酶(GUS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)抗原浓度。

  试剂盒组成:

  试剂盒组成48孔配置96孔配置保存

  说明书1份1份

  封板膜2片(48)2片(96)

  密封袋1个1个

  酶标包被板1×481×962-8℃保存

  标准品:180ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存

  标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存

  酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

  样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

  显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

  显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

  终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

  浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存

  标本要求:

  1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

  2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步骤:

  1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为120ng/ml,80ng/ml,40ng/ml,20ng/ml ,10ng/ml)。

  2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

  5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7. 温育:操作同3。

  8. 洗涤:操作同5。

  9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

  10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  注意事项:

  1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6. 底物请避光保存。

  7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

  9. 本试剂不同批号组分不得混用。

  10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

  计算:

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,

  在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD

  值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释

  倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标

  准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值

  代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释

  倍数,即为样品的实际浓度。

  试剂盒性能:

  1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

  2.批内与批见应分别小于9%和11%

  检测范围:

  3ng/ml - 160ng/ml

  保存条件及有效期:

  1.试剂盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6个月

来源:上海裕平生物科技有限公司作者:上海裕平生物科技有限公司

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