鱼总蛋白酶(t-Pro)Elisa试剂盒说明书

中国教育装备采购网2012-10-29 08:56围观1810次我要分享

  鱼总蛋白酶(t-Pro)Elisa试剂盒说明书

  本试剂盒仅供研究使用。

  检测范围: 96T

  15IU/L –400IU/L

  使用目的:

  本试剂盒用于测定鱼血清、血浆及相关液体样本中总蛋白酶(t-Pro)含量。

  实验原理

  鱼总蛋白酶(t-Pro)Elisa试剂盒说明书本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼总蛋白酶(t-Pro)水平。用纯化的鱼总蛋白酶

  (t-Pro)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入总蛋白酶(t-Pro),

  再与HRP 标记的总蛋白酶(t-Pro)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底

  洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最

  终的黄色。颜色的深浅和样品中的总蛋白酶(t-Pro)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下

  测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中鱼总蛋白酶(t-Pro)浓度。

  试剂盒组成

  1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶

  2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(800IU/L) 0.5ml×1 瓶

  3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶

  4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份

  5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张

  6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

  标本要求

  1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

  马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

  2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步骤

  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

  释。

  400IU/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

  200IU/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

  100IU/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

  50IU/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

  25IU/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

  2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

  待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,

  然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

  量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

  4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

  5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此

  重复5 次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7. 温育:操作同3。

  8. 洗涤:操作同5。

  9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

  10 分钟.

  10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

  液后15 分钟以内进行。

  操作程序总结:

  计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

  OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标

  准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

  即为样品的实际浓度。

  注意事项

  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

  用完,板条应装入密封袋中保存。

  2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好

  控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值

  大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计

  算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6.底物请避光保存。

  7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

  8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

  9.本试剂不同批号组分不得混用。

  保存条件及有效期

  1.试剂盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6 个月鱼总蛋白酶(t-Pro)Elisa试剂盒说明书

来源:上海彩佑实业有限公司作者:上海彩佑实业有限公司

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