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  • 牛支原体(mycoplasma)酶联免疫分析(ELISA)

    中国教育装备采购网 2012/11/9 13:20:11 围观85次 我要分享

    牛支原体(mycoplasma)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于检测牛血清,血浆中支原体水平。实验原理: 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中牛支原体(mycoplasma)。用纯化的牛支原体抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中支原体相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的支原体抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中牛支原体的存在与否。试剂盒组成:试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存说明书 1份 1份 封板膜 2片(48) 2片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存阴性对照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存阳性对照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤:1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。结果判定: 试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为支原体阴性 阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为支原体阳性注意事项1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物请避光保存。6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月 上海裕平生物科技有限公司主要经营各种品牌档次的ELISA试剂盒,品质保证,售后服务完善。并提供免费代检测。服务于高校及免疫学科研单位。技术人员更好的为您服务。

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