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  • 液相色谱法测定连翘败毒丸中连翘苷的含量

    中国教育装备采购网2013-01-17 11:16围观1784次我要分享我要投稿

      摘要:连翘苷可药用,具有清热、解毒、散结排脓等功效。主治温热、疮疡、瘰疬、丹毒、班疹、流感,可水煎服,或加入方剂中。人药,兽药,农业用途广泛。常用于风热感冒。

      建立连翘败毒丸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱:AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm。流动相:乙腈-水(25︰75V/V)。流速:1.0ml·min-1。检测波长:230nm,柱温30℃。结果:连翘苷在0.005~1.0mg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9999);平均加样回收率为96.7%,RSD=2.7%(n=6)。结论:该方法简便易行,结果准确可靠,可适用于连翘败毒丸的质量控制。

      连翘败毒丸为《卫生部药品标准》第二十册(中药成方制剂)收载的品种,由连翘、金银花、苦地丁、天花粉等19味中药组成,具有清热解毒、散风消肿之功效。临床用于脏腑积热、风热湿毒引起的疮疡初起、红肿疼痛、憎寒发热、风湿疙瘩、遍身刺痒、大便秘结。处方中连翘为君药,连翘苷为其主要有效成分,原标准中无含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量,本文采用高效液相色谱法测定连翘败毒丸中连翘苷的含量,以期为该制剂的质量提供快速、准确的测定方法,现报告如下。

      1、仪器与试药

      LC-2010A高效液相色谱仪,CLSAA-VP色谱工作站紫外检测器;连翘苷对照品(批号:110821-200406),由中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用;连翘败毒丸为市售样品(北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂,规格6g/袋,批号:6082655;呼伦贝尔哈慈制药厂,规格6g/100粒,批号:20051201,20051205)。乙腈为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。

      2、方法与结果

      2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱:AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm。流动相:乙腈-水(25︰75V/V)。检测波长:230nm;流速:1.0ml·min-1;柱温30℃。

      2.2溶液制备

      2.2.1对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的连翘苷对照品适量,加甲醇制成0.10mg·ml-1的对照品贮备液;再精密量取对照品贮备液适量,加甲醇制成0.05mg·ml-1的对照品溶液,即得。

      2.2.2供试品溶液的制备取重量差异项下的连翘败毒丸10g,研碎,混匀,取约6g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液5ml,蒸干,残渣加水20ml使溶解,用三氯甲烷振摇提取5次,每次20ml,合并三氯甲烷液,回收至干。残渣用50%甲醇溶解,转移至5ml量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,离心,取上清液,或滤过,取续滤液,即得。

      2.2.3阴性对照溶液的制备取除连翘以外的处方中其余药材的十分之一量,按法制成丸,再按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

      2.3专属性试验分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪,记录色谱图。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上有相同保留时间(连翘苷16.290min)的色谱峰,阴性试验无干扰,证明本法可行。

      2.4线性关系考察精密吸取连翘苷对照品贮备液(浓度:0.10mg·ml-1)适量,分别置于10ml量瓶中,加甲醇定容,配成浓度分别为0.005、0.01、0.03、0.05、0.08、0.1mg·ml-1的溶液6份,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10μl,注入液相色谱仪,测得峰面积。以峰面积(A)为纵坐标,其浓度(C)为横坐标,得连翘苷的回归方程为:A=48148500.13C+25281.19,r=0.9999(n=6)。结果表明,连翘苷在0.005~0.1mg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。

      2.5精密度与稳定性试验精密吸取连翘苷对照品溶液(0.05mg·ml-1)10μl,在上述色谱条件下重复进样6次,求得连翘苷溶液峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.7%(n=6),表明精密度较好。取同一对照品溶液,在0、4、8、12、24、48h分别进行测定,结果表明连翘苷对照品溶液在48h内稳定,RSD为0.8%(n=6)。

      2.6重复性试验取供试品(批号6082655)共6份,分别按“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液,进行测定,求得连翘苷含量的RSD为1.1%(n=6),表明重现性较好。

      2.7加样回收率试验精密称取已知含量的样品(批号:6082655,连翘苷含量0.06mg·g-1,平均重量6.003g·袋-1)适量,共6份,分别置具塞锥形瓶中。分别精密加入连翘苷对照品贮备液(0.1mg·ml-1)各2ml,按“2.2.2供试品溶液的制备”方法操作,得回收率试验溶液,依法测定。

      2.8样品含量测定分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定三批样品中连翘苷峰面积,按外标法计算其含量(n=5),结果见表2。表1连翘苷加样回收率试验表23批样品含量测定结果。

      3、讨论

      3.1通过对3批样品中连翘苷的测定,结果表明最高含量为0.36mg·6g-1,最低为0.28mg·6g-1,综合考虑确定限量每6g含连翘苷不得低于0.20mg。

      3.2流动相的选择试验中采用不同的流动相甲醇-水(25︰75),乙腈-水-冰醋酸(25︰75︰0.5)。结果表明采用流动相乙腈-水(25︰75)的色谱图基线较稳。

      3.3本方法结果准确,方法简便,重现性及回收率均理想,可以作为该制剂的质量控制方法。

    来源:仪器信息网我要投稿
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