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  • 液相色谱仪测定肾康注射液中原儿茶醛含量

    中国教育装备采购网2013-03-06 11:42围观1836次我要分享我要投稿

      摘要:原儿茶醛是四季青叶中抗心绞痛的主要有效成分之一,对心血管系统可增加冠脉流量、降低心肌兴奋性和传导性,对急性心肌缺血缺氧所致的心肌损伤具有明显保护作用。

      中药肾康注射液由黄芪、丹参等4味中药制成,是用于治疗慢性肾衰的一种新药,给药方式为静脉滴注,制剂稳定,无毒副作用,疗效显著安全。有文献报道用TLC法[1,2]或HPLC[3~5]法测定丹参中原儿茶醛含量。本文采用TLC法作为样品前处理的纯化手段,以HPLC法测定丹参制剂肾康注射液中原儿茶醛含量,本法准确、灵敏、重现性好。

      1药品与试剂

      原儿茶醛对照品由中国药品生物制品检定所提供;肾康注射液由成都市中医药研究所制剂研究室研制,批号:910314、920815、931014,规格:每瓶100mL;实验用水为双重蒸馏水;其余试剂均为分析纯。

      2仪器与色谱条件

      STI5000液相色谱仪,紫外检测器。分析柱:ShimpackODS柱(5μm,6mm×150mm);预柱:YWG-C18柱(7μm,4.6mm×150mm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(24∶75∶1);流速:1.0mL.min-1;柱温:30℃;检测波长:328nm。

      3直线回归方程的测定

      取原儿茶醛对照品,加甲醇溶解并稀释成1mg*mL-1的对照品贮备液,放冰箱4℃保存备用;精密量取该贮备液适量,用甲醇配成含原儿茶醛分别为20、40、60、70、80及120μg.mL-1的对照品溶液,各进样10μL,按色谱条件测定。以原儿茶醛基线构成之面积称峰面积。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h>峰面积(Y)对对照品溶液浓度(X)回归得直线方程:

      Y=177029 70651Xr=0.9996

      结果表明:原儿茶醛检测限为0.9μg.mL-1(S/N=3∶1),线性范围为20~120μg.mL-1。

      4测定方法

      4.1供试品溶液的制备精密量取样品20mL,置于用水湿润过的60mL分液漏斗中,加饱和氯化钠溶液5mL,用乙醚提取3次,每次20mL,振摇1min,合并提取液,水浴(60~65℃)蒸干,用无水乙醇溶解残渣,定量转移至1mL容量瓶中,并稀释至刻度,作为薄层色谱分离的供试品溶液。

      4.2TLC分离和HPLC测定精密量取上述供试品溶液200μL,点于含0.5%CMC硅胶G薄层板上(10cm×20cm,层厚0.5mm,105℃活化30min,点成5cm条状),另点1mg.mL-1原儿茶醛对照品无水乙醇溶液2μL于另一侧作对照,用展开剂氯仿-苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶10∶8∶1.8)展开,取出挥干溶剂,晾干30min,于360nm紫外光灯下(见图1),以原儿茶醛对照品前后亮黄色荧光条斑为界划痕,刮取划痕内硅胶粉,置具塞离心管中,加入无水乙醇10mL,用力振摇1min,离心(3000r.min-1,5min),倾出上清液。如此反复洗脱3次,合并洗脱液,蒸干,残渣用适量甲醇分数次溶解并转至1mL容量瓶中,挥去溶剂,精密加甲醇1mL,振荡使溶解,吸取10μL进行测定(见图2-A),用二点内插法计算原儿茶醛含量,即得。

      4.3空白检查取不含丹参的空白样品(940624)20mL,按项“4.1”、“4.2”操作,吸取10μL注入液相色谱仪(见图2-B),可见空白样品在原儿茶醛出峰处无干扰峰。

      5加样回收率测定

      准确量取已测知含量的样品,定量加入不同浓度水平原儿茶醛对照品溶液,按上述测定方法测定

      6重复性测定

      取40μg.mL-1对照品溶液10μL进样,连续6次,测得峰面积的RSD为0.11%。

      7样品测定

      取样品20mL,按项“4.1”、“4.2”方法处理,进样10μL,测定910314、920815、931014批号样品含量分别为3.191、3.063、3.108μg.mL-1(n=3),RSD分别为0.22%、0.31%、0.19%。

      8讨论

      8.1采用不同溶剂提取样品后直接溶解进样,分离效果不理想,图谱杂乱。用柱层析和薄层法进行预处理结果比较,以薄层法简单易行,甩掉部分杂质干扰,HPLC图谱清晰。

      8.2在360nm紫外线下,原儿茶醛斑无荧光,故以原儿茶醛对照品斑前后亮黄色荧光条斑为界刮下洗脱,保证样品中原儿茶醛全部被刮下。

      8.3在样品预处理时曾采用氯仿、甲酸乙酯、苯及乙醚进行萃取,结果以乙醚提取为佳,3次提取回收率为99%。加入饱和氯化钠以防止提取时乳化物产生。

    来源:仪器信息网我要投稿
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