荧光RT-PCR技术检测H7N9禽流感病毒法问世

中国教育装备采购网2013-04-24 09:57围观1751次我要分享

  4月17日,在北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目“禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR定型技术研究”鉴定会上,专家组一致认为:该项目创新性地实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型,可在一次检测中确认样品中是否存在H7N9亚型禽流感病毒或其他H7亚型和N9亚型的禽流感病毒;在通用性、特异性、灵敏性上,技术优势突出。专家组同意项目成果通过鉴定,并建议在进一步扩大和完善动物临床验证实验基础上,尽快推广应用。

  目前,在国内通用的确诊禽类中禽流感病毒H7N9亚型的检测技术中,除采用传统的鸡胚病毒分离方法外,通常采用核酸检测方法,如普通PCR方法和基于荧光RT-PCR的“二步法”,但还没有建立起采用荧光RT-PCR技术“一步法”检测禽流感病毒H7N9亚型的方法。

  据该项目组负责人、北京局检验检疫技术中心动物实验室博士高志强介绍,项目在实验过程中,共建立了3种检测方法。最终的禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR检测方法是在禽流感病毒H7亚型和N9亚型单重荧光RT-PCR检测方法的基础上通过优化建立,从而实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型。这种方法不仅能检测最近流行的H7N9毒株,还可以用于筛查其他H7亚型毒株。此方法不仅引物特异,而且探针特异,这一“双特异”性保证了结果的准确性,同时比普通PCR检测技术要灵敏100~1000倍。

  高志强还指出,本项目在实施过程中,制备了H7N9病毒的HA和NA基因全长的外标物质,具有均匀和稳定的特点,可在检测过程中对逆转录和PCR扩增这两个重要环节进行控制,对规范诊断检测试剂和实验室质量控制具有重要意义,使不同试剂的检测结果具有了可比性,可用于消除不同人员操作间的差异,解决了目前H7N9检测缺乏质量控制外标物质的现状。

  鉴定会上,由来自中国农业大学、中国医学科学院、中国科学院、中国农业科学院等单位的7名专家组成的鉴定委员会审查了项目组提交的相关资料,听取了项目组的汇报,审阅了相关鉴定资料,最终同意项目成果通过鉴定。

  北京局自2001年开始开展荧光RT-PCR检测技术研究,是国内首家将荧光PCR技术应用到检验检疫领域和动物疫病防控领域的单位,并在实践中不断发展完善荧光RT-PCR检测技术,先后建立了禽流感病毒、新城疫病毒、口蹄疫病毒等多项荧光RT-PCR检测技术,获得国内首个动物疫病荧光PCR检测新药证书。

  据悉,自3月31日国家卫生和计划生育委员会通报上海和安徽发现3例人感染H7N9禽流感病例后,在国家质检总局有关领导的指导下,该局第一时间成立了禽流感检测技术研究应急专项小组。北京局局长齐京安号召:“疫情就是命令,我们要迅速行动、全力以赴,为保障人民群众身体健康作出检验检疫部门的贡献。”一声令下,科技人员纷纷行动起来:及时收集、查阅最新流感资料;第一时间获得此次H7N9亚型禽流感病毒的安徽株和上海株的基因序列;结合实验室多年整理保存的禽流感研究资料,重点针对HA基因和NA基因进行序列分析比对……经过一系列努力,最终找到了变异位点,确定了双重荧光RT-PCR检测技术研究方案。

  北京局副局长李忠榜表示,该项目为禽流感病毒H7N9亚型的检测提供了快速、高效方法,能够检测到样品中微量禽流感病毒。该课题鉴定后,课题组还将做大量的验证工作,在实践的检验过程中不断完善并制定禽流感病毒H7N9亚型检测国家标准,以便将该技术尽早应用到防控工作中,为确保活禽和禽产品的进出口安全,为国内养殖企业禽流感疫情普查,为老百姓吃上放心禽产品提供服务。同时,该局会尽快将研究成果应用到检验检疫工作中,接受实践检验,为提高口岸一线的检测能力做好技术储备和技术支持工作。

来源:中国质量新闻网

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