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  • ELISA试剂盒实验“花板”问题分析

    中国教育装备采购网 2013/10/11 10:47:00 围观238次 我要分享

      ELISA试剂盒结果“花板”的问题对检测数据造成了很大影响,往往会使检测者做出误判,是实验中必须要注意和避免的。

      使用对血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等实验检测的结果中,空白和阴性,阳性对照以及室内质控孔结果正常,根据卫生部临检中心提供的数据,HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范围均为2NCU,但血液标本孔的OD值比较高(大多数OD值≥0.070)。标本的阳性率很高,每板除对照孔外,有时阳性高达10孔之多,而大多数真阳性标本都出现弱阳性结果。

      针对这种“花板”现象我们通过多次实验的分析和判断,总结了一些经验,分析如下:

      1 ELISA实验标本、试剂、仪器

      1.1 标本 出入境人员的血液标本。

      1.2 试剂 HBsAg、HCV、HIV、梅毒试剂均为不同厂家的ELISA试剂盒。

      1.3 仪器 LD4-2型脑心机BID RAD1575型洗板机BID RAD550酶标仪。

      2 方法

      所有被检出入境人员的血液标本,按照各个厂家提供的ELISA试剂盒说明书进行HBsAg-HCV-HIV梅毒等检验项目操作。所有试剂均在有效期内使用。

      3 结果

      所使用不同厂家的试剂有时会出现“花板”问题。

      4 ELISA试剂盒分析

      在所有标本进行检测的过程中,所用的仪器及加样过程都处于正常状态的情况下,步骤均按照各种试剂说明书的要求去做,排除实验所用仪器和操作步骤对实验结果的影响外,ELISA试剂盒内的空白、阴性和阳性对照以及室内质控值都很正常,只有检测的血液标本情况异常。根据国家和疾控中心报告阳性率的比例不应该是很高的情况下,HBsAg在用ELISA之前都经过了快速金标试剂的检测,阳性标本得到了一定的控制。因此,原因可能是在标本的处理,特别是放置时间、离心速度和离心时间方面的问题。所以,标本的处理就成为实验结果的主要可疑因素。

      为了避免“花板”现象的出现,降低检测的假阳性率,获取准确的实验结果,应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便省时的ELISA试剂。

      实验过程中应该注意的问题:

      (1)抽取样本时应抽出足够检验量的血液标本,按比例加抗凝剂,便于离心,得到足够的血清(血浆)。

      (2)血液标本应置于室温下1~2h,使血液凝固收缩,然后离心检测或让血液过夜后再检测。这样才能使得血液充分收缩,让标本中的非特异性物质所致的假阳性率降至最低。

      (3)检测之前,加大离心转速,尽量延长时间,使血细胞和纤维蛋白充分沉淀,让血细胞与血清彻底分离。

      (4)加样时不能加入红细胞或纤维蛋白,要按照操作说明书去做,否则会影响实验结果。

      (5)封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板”的出现。

      (6)手工洗板时应注意液体被溅出或孔与孔之间的液体溢出,连成整体液面后产生“花板”。用洗板机洗板时应防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。

     

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