• 首页
  • 装备资讯
  • 热点专题
  • 人物访谈
  • 政府采购
  • 产品库
  • 求购库
  • 企业库
  • 院校库
  • 案例·技术
  • 会展信息
  • 行业日历
  • 质粒DNA提取实验步骤

    中国教育装备采购网2013-11-12 11:00围观189次我要分享

      质粒DNA提取可以:(1)快速纯化质粒;(2)用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。实验方法原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。

      提取质粒的基本步骤分为三步:

      ①细菌的培养和质粒的扩增

      ②细菌菌体的裂解

      ③质粒DNA的纯化

      实验材料 大肠杆菌

      试剂、试剂盒 Tris-Hcl EDTA 葡萄糖 NaOH KAac NaAc 异丙醇 溶菌酶 酚:氯仿 无水乙醇 LB培养基

      仪器、耗材 超净工作台 培养箱 摇床 恒温水浴锅 台式离心机 取液器 低温冰箱 冷冻真空干燥机 电泳仪 水平电泳槽 紫外观测仪

      实验步骤 一、材料与试剂准备

      1. 材料:大肠杆菌。

      2. 仪器:超净工作台,培养箱,摇床,恒温水浴锅,台式离心机,取液器一套,低温冰箱,冷冻真空干燥机,电泳仪,水平电泳槽,紫外观测仪。

      3. 试剂:

      (1)Solution I :25 mM Tris-Hcl(pH7.4),10 mM EDTA(pH8.0),50 mM葡萄糖,高压灭菌,4℃保存。

      (2)Solution II :0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用。

      (3)Solution III :5 N KAc pH4.8,高压灭菌,4℃保存。

      (4)3 M NaAc pH5.2,高压灭菌,4℃保存。

      (5)异丙醇,溶菌酶(8 mg/ml),酚/氯仿,无水乙醇,70%乙醇,LB培养基,电泳试剂。

      二、操作步骤

      1. 细菌繁殖:LB培养基,2 ml/20 ml,37℃,200 rpm,摇一摇,过夜。

      2. 离心10 min,5 000 rpm, 4℃;弃上淸液。

      3. 沉淀(菌体细胞)预冷的TES缓冲液洗涤,离心10 min,5 000 rpm, 4℃,加入预冷的1 ml Solution I,冰浴10 min。

      4. 重新悬浮,加入150 ul溶菌酶母液,室温放置5 min。

      5. 加入1.2 ml Solution II, 冰浴5 min。

      6. 加入0.9 ml预冷乙酸钾,混匀,离心10 min,12 000 rpm,4℃。

      7. 加入1.5 ml异丙醇,-20℃冰箱内放置15 min。

      8. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。

      9. 取沉淀,悬于400 ul TE缓冲液中。

      10. 加入40 ul,3 M NaAc。

      11. 酚/氯仿,抽提,乙醇沉淀。

      12. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。

      13. 取沉淀,冷冻干燥,再悬浮于50 ul TE缓冲液中。

      14. 电泳检测提取DNA的质量。

    来源:上海卡努生物科技有限公司作者:上海卡努生物科技有限公司
    采购网二维码

    扫一扫,欢迎关注

    教育装备采购网官方微信

    掌握教育装备行业最新、最权威资讯

    相关阅读

  • 清华团队研制新型肝癌诊断试剂盒
    人民日报2017-01-04 10:01:33
  • DNA提取的几种方法
    中国教育装备采购网2016-08-15 09:42:07
  • 真菌简介及其DNA提取方法
    中国教育装备采购网2016-08-12 09:39:45
  • 细菌DNA的提取方法
    中国教育装备采购网2016-08-11 09:37:45
  • 豚鼠白介素12B(IL12B)ELISA试剂盒
    豚鼠白介素12B(IL12B)ELISA试剂盒
    豚鼠白介素12B(IL12B)ELISA试剂盒
    豚鼠白介素12B(IL12B)ELISA试剂盒
    中国教育装备采购网2016-08-10 10:13:38
  • 豚鼠补体因子B(CFB)ELISA试剂盒
    豚鼠补体因子B(CFB)ELISA试剂盒
    豚鼠补体因子B(CFB)ELISA试剂盒
    豚鼠补体因子B(CFB)ELISA试剂盒
    中国教育装备采购网2016-08-10 10:12:16
  • 豚鼠白介素2(IL2)ELISA试剂盒
    豚鼠白介素2(IL2)ELISA试剂盒
    豚鼠白介素2(IL2)ELISA试剂盒
    豚鼠白介素2(IL2)ELISA试剂盒
    中国教育装备采购网2016-08-10 10:11:45
  • 豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA检测试剂盒

    豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA检测试剂盒
    中国教育装备采购网2016-08-10 10:10:56
  •