质粒DNA提取实验的?操作步骤

中国教育装备采购网2013-11-26 11:09围观147次我要分享

  质粒DNA提取实验的操作步骤:

  1. 细菌繁殖:LB培养基,2 ml/20ml,37℃,200 rpm,摇一摇,过夜。

  2. 离心10 min,5 000 rpm, 4℃;弃上淸液。

  3. 沉淀(菌体细胞)预冷的TES缓冲液洗涤,离心10 min,5 000 rpm, 4℃,加入预冷的1 ml Solution I,冰浴10 min。

  4. 重新悬浮,加入150 ul溶菌酶母液,室温放置5 min。

  5. 加入1.2 ml Solution II, 冰浴5 min。

  6. 加入0.9 ml预冷乙酸钾,混匀,离心10 min,12 000 rpm,4℃。

  7. 加入1.5 ml异丙醇,-20℃冰箱内放置15 min。

  8. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。

  9. 取沉淀,悬于400 ul TE缓冲液中。

  10. 加入40 ul,3 M NaAc。

  11. 酚/氯仿,抽提,乙醇沉淀。

  12. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。

  13. 取沉淀,冷冻干燥,再悬浮于50 ul TE缓冲液中。

  14. 电泳检测提取DNA的质量。

 

来源:上海劲马生物科技有限公司作者:上海劲马生物科技有限公司

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