原代细胞培养操作

中国教育装备采购网2014-01-15 13:30围观189次我要分享

  取材:

  1. 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。

  2. 把整个孕鼠浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒,取出后放在大平皿中携入超净台。

  3. 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用无菌镊子将皮肤扯向后腿。

  4. 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部,取出含有胚胎的子宫,置于无菌的培养皿上。

  5. 剔除胚胎周围的包膜(若胚胎较大,应剪去头、爪),将胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。用平衡盐溶液漂洗胚胎至清洗液清亮。

  切割(2人一组):

  6. 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中,用平衡盐溶液漂洗。

  7. 然后用眼科手术剪刀小心地反复剪切胚胎,直到成1mm3左右的小块,再用平衡盐溶液清洗组织块至清洗液清亮。

  8. 静置数分钟,使组织块自然沉淀到管底,弃去上清。

  消化、接种培养(2人一组):

  9. 视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液(约3ml),37℃中消化20—40分钟,每隔5分钟振荡一次。

  10. 静置,吸去上清,加2ml细胞生长液,用吸管反复吹打组织块,使细胞分离,静置,使未分散的组织块下沉。

  11. 取部分细胞悬液接种至加了细胞生长液(约3ml)的培养瓶中(若计数,按每细胞瓶1x106细胞的数量接种),置于37℃,二氧化碳培养箱中培养。培养3~5天观察结果。

 

来源:上海创赛科学仪器有限公司作者:上海创赛科技有限公司

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