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  • 人 (Human)Apelin-13ELISA试剂盒说明书

    中国教育装备采购网 2014/2/3 14:00:00 围观178次 我要分享

           人 (Human)Apelin-13ELISA试剂盒说明书

    试验原理:

        Apelin-13试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知Apelin-13浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将Apelin-13和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,ELISA试剂盒去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Apelin-13的浓度呈比例关系。

    自备材料

    蒸馏水。

    加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

    振荡器及磁力搅拌器等。

    安全性

    避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

    实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

    不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

    操作注意事项

    试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

    实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

    不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

    使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

    使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

    洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

    底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

    加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

    按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

    样品收集、处理及保存方法

    血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

    血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

    细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

    组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

    保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

    操作步骤

    使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

    根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

    加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

    甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

    每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

    甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

    每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

    取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

    在450nm波长处测定各孔的OD值。

    局限

    6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。

    试剂盒性能

    1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

    2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

    3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

    结 果 判 断 与 分 析

    1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

    2、以吸光度OD值为纵坐标(Y)ELISA试剂盒,相应的Apelin-13标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的Apelin-13含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

    3、检测值范围:0-80ng/ml

    4、敏感度: 0.1 ng/ml

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