植物原生质体的制备

中国教育装备采购网2014-03-24 10:50围观323次我要分享

原生质体是指植物细胞去掉细胞壁的裸露部分。它在培养条件下,①具有再生细胞壁,进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力;②具有摄取外源大分子、细胞器,以及细菌,病毒的能力,因此是进行遗传操作,基因转移的好材料;③通过同种和异种植物的原生质体融合,可产生异核体,实现体细胞杂交,培育出新品种。

实验原理

去掉植物细胞壁的方法可以是机械的人工操作,也可以利用酶解法。较早利用机械法制备原生质体的首推Klercker(1892),直到1960 年英国科学家Cocking 才第一次用酶法大量制备原生质体。本实验以植物的叶肉组织为材料,利用纤维素酶和果胶酶来消化细胞壁,分离细胞。

实验用品

器具:显微镜、离心机、离心管、剪刀(2)、镊子(2)、吸管、小培养皿、载片、盖片。

试剂:0.16mol/LCaCI.2.H2O、20%蔗糖液、酶解液

材料:油菜或菠菜或烟草

实验方法步骤

1、取材根据实验目的和条件选取不同的材料

2、分离原生质体

① 撕叶下表皮

② 酶解 将撕去下表皮的叶片剪成小块,放在盛有5mL 酶液的小培养皿中,让去除下表皮的一面接触酶液,辅满一层,在25~28℃下酶解60~90 分钟

3、收集纯化

(1)用吸管将酶解液吸至5mL 离心管中,以600rpm 离心5 分钟以上,使原生质体沉降

(2)将上清(酶解液)回收,剩下原生质体及残渣于管底

(3)加氯化钙液约2mL,轻轻吹打均匀

(4)用注射器向离心管底部缓缓注入蔗糖约2—3mL,出现下部蔗糖液,上部原生质体悬浮液

(5)以600rpm 离心10 分钟,在两液相之间出现一条绿色带,便是纯净的原生质体

4、观察或培养

取少许原生质体于载片上,盖片观察其形态,或者将原生质体接种在培养基上进行培养,再生植株。

来源:上海创赛科学仪器有限公司作者:上海创赛科技有限公司

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