总补体(CH50)ELISA检测试剂盒人的说明

中国教育装备采购网2014-05-09 16:29围观1030次我要分享

总补体(CH50)ELISA检测试剂盒人的说明
一、检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人总补体(CH50)捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人总补体(CH50)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
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二、自备物品
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
5.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
三、操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
4.  随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.  所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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来源:北京杰辉生物技术有限公司作者:北京杰辉生物技术有限公司

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