应用紫外分光光度法应注意的环节

中国教育装备采购网2014-06-09 10:38围观994次我要分享

使用UV法应注意以下环节:

       1 仪器的校正和检定:

       1.1 波长  由于温度变化对机械部分的影响,仪器的波长经常会略有变动,因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外,还应于测定前校正测定波长。

       1.2 吸收度 吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。

       1.3 狭缝宽度  选择仪器的狭缝宽度,应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准,对于《中国药典》UV法测定的大部分品种,可以使用2nm缝宽,但对某些品种如青霉素钾及钠的吸收度检查则需要1nm缝宽或更窄,否则其264nm的吸收度会偏低。

       1.4 天平和玻璃仪器的检定所用的容量仪器及分析天平应经过检定,如有偏差应加上校正值。

       1.5 吸收池配对  石英吸收池对紫外光亦有吸收,1 em的吸收池在波长220~270 nm的范围内,以空气作为100%,其透光率往往小于100%,同时每个吸收池不可能完全相同,故在每次测定前应做吸收池配对试验。方法是取干燥洁净的吸收池,均装入测定用空白溶剂,以一只吸收池作空白,用测定时所用的波长测定其他吸收池的吸收度,最后选择吸收最小的一只作为配对,测定并记录下其它吸收池的吸收度,供试品液的实际吸收度应是与吸收池(有空白溶剂时)吸收度之差。为减少误差,常用一个配对杯测定若干样品(也减少计算麻烦),但应注意换液时充分洗涤。

        2 对溶剂的要求:由于溶剂与溶质分子间形成氢键、偶极化等的影响,可以使溶质吸收波长发生位移。通常极性溶剂比非极性溶剂的影响大,在选择溶剂时应予以注意。测定供试品前,应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否有吸收峰,是否影响供试品测定。每次测定时应采用同一厂家、同一批号的试剂配制混合均匀的同一批溶剂。

        3 检验: 3.1 溶液配制  称量应按药典规定进行。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少,转移稀释时所取容积一般应不少于5mL。含量测定供试品应称取2份,如为对照品比较法,对照品也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份,平行操作。每份结果对平均值的偏差应在4-0.5%以内。作鉴别或检查时可取样品1份。

         3.2 测定  除另有规定外,应在规定的吸收峰波长4-2 nm以内,再测试几个点的吸收度,以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确,除另有规定外,吸收峰最大波长应在该品种项下规定的波长4-1nm以内,否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度。取吸收池时,手指拿毛玻璃面的两侧。样品溶液的量以池体积的4/5为宜,使用挥发性溶液时应加盖,透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净,检视应无残留溶剂,为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面,可先用蘸有空白溶剂的擦镜纸擦拭,然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放人样品室时应注意每次放入的方向相同。使用后用洗涤剂及水冲洗干净,晾干防尘保存。吸收池如污染不易洗净时可用发烟硫酸+硝酸(3:1 )混合液稍加浸泡后,洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时,吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡,否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面,并应充分用水冲洗,以防铬酸钾吸附于吸收池表面。

来源:上海嘉鹏科技有限公司作者:上海嘉鹏科技有限公司

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