• 首页
  • 装备资讯
  • 热点专题
  • 人物访谈
  • 政府采购
  • 产品库
  • 求购库
  • 企业库
  • 院校库
  • 案例·技术
  • 会展信息
  • 行业日历
  • 卡迈舒生物教您如何选择ELISA试剂

    中国教育装备采购网 2014/6/23 10:46:00 围观1008次 我要分享

    在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文(2.2)已述,ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。

     

    完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:

     

    (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);

     

    (2)酶标记的抗原或抗体(结合物);

     

    (3)酶的底物;

     

    (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);

     

    (5)结合物及标本的稀释液;

     

    (6)洗涤液;

     

    (7)酶反应终止液。

     

    3.1 免疫吸附剂

     

    已包被抗原或抗体的固相载体在低温( 2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试盒,仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和 包被过程。

     

    3.1.1 固相载体

     

    固相载体在 ELISA测定过程中作为吸附剂和容器,不参与化学反应。可作ELISA中载体的材料很多,最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较 强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性,加之它的价格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料 ,可制成各种形式。

     

    ELISA载体的形状主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用,专用于EILSA的产品称为ELISA板, 国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测,有制成8联孔条或12联孔条的,放入座架后,大小与标准 ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测,并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪 器用于微量滴定板型的ELISA检测,包括加样、洗涤、保温、比色等步骤,对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后,其吸 附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加,应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多,但用于间接法测抗体时空白值较大。

     

    良好的 ELISA板应该是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELIS A板由于原料的不同和制作工艺的差别,各种产品的质量差异很大,因此,每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能。常用的 检查方法为:以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG 抗体,保温后洗涤,加底物显色,终止酶反应后,分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件,使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部 读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差,应小于10%。

     

    与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为 ELISA固相载体,聚氯乙烯的特点为质软板薄,可剪割,价廉,但光洁度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋 白质的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。

     

    为比较不同固相在某一 ELISA测定中的优劣,可应用如下的试验:用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本,将它们进行一系列稀释后, 在不同的固相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定,然后比较结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大,这种载体就 是这一ELISA测定项目的最合适的固相载体。

     

    在 ELISA中,用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠,表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。ELISA板孔的吸附面积约 为200mm2,小珠均为1000mm2,将近ELISA板孔的5倍。吸附面积的增大即意味着固相抗原或抗体量的增加。再者,球 型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于最佳反应状态,因此珠式ELISA的反应往往更为灵敏。小 珠的另一特点是更易于使洗涤彻底,使用特殊的洗涤器,使小珠在洗涤过程中滚动淋洗,其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。但由于磨砂 工艺的难度较大,小珠的均一性较差。

     

    小试管作为固相载体也有较大的吸附表面,而且标本的反应量也相应增加。板式及珠式 ELISA的标本量一般为100-200ul,而小试管可根据需要加大反应体积,标本反应量的增加有助于试验敏感性的提高。小试 管还可以当作比色杯,最后直接放入分光光度计中比色。

     

    也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为 ELISA固相载体的。其优点是表面积极大,反应在悬液中进行,其速率与液相反应近似。以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体 ,反应后用磁铁的吸引进行分离,洗涤方便,试剂盒一般均配以特殊仪器。

     

    3.1.2 包被的方式

     

    将抗原或抗体固定在过程称为包被 (coating)。换言之,包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物

    点击进入卡迈舒生物技术(上海)有限公司展台查看更多 来源:卡迈舒生物技术(上海)有限公司 我要投稿
    2018南京展
    采购网二维码

    扫一扫,欢迎关注

    教育装备采购网官方微信

    掌握教育装备行业最新、最权威资讯

    相关阅读

  • ELISA技术应用概览和方法学开发初析
    中国教育装备采购网07-03
    ELISA技术应用概览和方法学开发初析简简介介本文适用于已有过ELISA应用相关经验,对ELISA问题排查和方法开发有进一步需求的广大科研人员,更加适用于ELISA相关医疗诊断试剂盒开发,体内药代药动...
  • 如何应对ELISA基质效应?研科生物
    中国教育装备采购网07-03
    这个坑,别栽了!如何应对ELISA基质效应?2001年6月,美国曾爆出过一个大新闻:因为临床诊断中,hCG免疫检测试剂盒得到了假阳性结果,使一位名叫JenniferRufer的女性被误诊为癌症,因此经历了长期...
  • 科普:食品安全检验ELISA试剂盒指哪些?

    科普:食品安全检验ELISA试剂盒指哪些?
    中国教育装备采购网03-06
    转眼间就迎来了早春的三月,尽管感觉还有一丝的寒意,但春已不觉间挤进了季节的门槛,带着些许的微温,漾开了人们的脸上的一丝笑意。在这个阳春三月的...
  • ELISA试剂盒操作时灵敏度偏低的原因有哪些?

    ELISA试剂盒操作时灵敏度偏低的原因有哪些?
    中国教育装备采购网11-08
    今天上海恒远小编为大家整理了一份关于ELISA试剂盒操作时灵敏度偏低的原因有哪些?希望能帮助到您:1、在运输途中时间太长,温度太高,尽量缩短运输时间...
  • ELISA试剂盒17个操作技巧

    ELISA试剂盒17个操作技巧
    中国教育装备采购网11-06
    对于做elisa实验的老师们来说,elisa做的成功与否?存在很多小技巧,这些小技巧看起来微不足道,但是实际上却在实验中起到了至关重要的作用,掌握这些小...
  • 唯美金秋,上海恒远赴同济大学上门取样

    唯美金秋,上海恒远赴同济大学上门取样
    中国教育装备采购网09-12
    秋天,大部分树叶都渐渐地变黄了,有的已经枯落下来,唯有枫叶红了起来,火红火红的,为秋天增添了一道亮丽的风景线。在这个唯美的金秋季节里上海恒远...
  • 小鼠白介素ELISA试剂盒具有哪些优势
    中国教育装备采购网08-07
    小鼠白介素ELISA试剂盒的特点:1.专一性强。抗原与抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特...
  • 南京医科大学再次与上海恒远友情合作成功

    南京医科大学再次与上海恒远友情合作成功
    中国教育装备采购网07-26
    夏天像一位血气方刚的战士,那似火的骄阳便是他闪亮的盔甲;夏天像一位充满活力的少女,那满树的绿叶便是她艳丽的裙装;夏天像一个玩皮可爱的小孩,那时...
  • 广州市奥威亚电子科技有限公司
    产品线 企业简称 成立时间