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  • 大鼠结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒有哪些方法

    中国教育装备采购网 2014/7/29 9:35:00 围观1180次 我要分享

    大鼠结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒操作过程中可能出现的问题和解决方法:

    为什么ELISA试剂盒出现白板,阳性对照不显色?

    1、未加A、B显色液——不要漏加A液和B液;

    2、洗涤液配制有误——请按说明书所示稀释倍数配制;

    3、未加酶结合物而认为已加入——注意不要漏加;

    4、终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用——每次加液前均应看清标签。

    为什么ELISA试剂盒显色淡,灵敏度偏低?

    1、试剂盒在运输途中时间太长,温度太高——尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温;

    2、试剂盒未充分平衡——试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃);

    3、培养箱温度不足37℃——注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意;

    4、保温时间不足——校正定时钟准确定时;

    5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加——按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数;

    6、移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁——校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,最好一次性使用;

    7、蒸馏水水质有问题——使用新鲜合格的蒸馏水;

    8、底物作用时间不足——准确定时。

    为什么ELISA试剂盒重复性不佳?

    1、样品数量多少不一,加样时间有长有短——重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近;

    2、保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致——重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性;

    3、加样量不一致——样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。

    为什么ELISA试剂盒背景深,全部呈有色,临界对照OD值超出规定范围?

    1、洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留——浓缩洗液准确配制;10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤,彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染;

    2、样品污染——样品应新鲜采集,或低温保存,防止污染;

    3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长——调整培养箱温度,准确定时;

    4、吸嘴重复使用,未洗净或消毒不彻底——吸嘴尽可能一次性使用;

    5、蒸馏水被污染——使用新鲜蒸馏水;

    6、酶等试剂混用——不同批号试剂勿混用;

    7、一次实验的标本量过多,加样时间太长,导致实际反应时间延长——合理安排实验,避免几块酶标板同时加样。恒远图片.jpg

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