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  • 重组胰岛素的鉴别方法赏析

    中国教育装备采购网 2014/8/7 9:14:00 围观1118次 我要分享

    重组胰岛素的鉴别方法赏析

    在当今理论中,重组胰岛素在实验中有很多的鉴别方法,每一种都大不相同,鉴别好坏关联着您实验的成败与否,为您不浪费科研经费,浪费时间,选以正确的胰岛素鉴别方法还是很有必要的,上海恒远生化试剂网是一支专业的科研试剂实验团队,有着丰富的经验极其实践能力,为您提供优质的鉴别方法{确保您的实验有据可依}

    (1)在效价测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与重组人胰岛素对照品峰的保
    留时间一致。
    (2)取该品适量,用0.1%三氟醋酸溶液制成每1ml中含10mg的溶液,取20μl,加0.2mol/L三羟甲基氨基
    甲烷-盐酸缓冲液(pH7.3)20μl、0.1%V8酶溶液20μl与水140μl,混匀,置37℃水浴中2小时后,加磷酸3μl,作为供试品溶液;另取重组人胰岛素对照品适量,同法制备,作为对照品溶液。照效价测定项下的方法,以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(pH2.3)-乙腈(90:10)为流动相A,乙腈-水(50:50)为流动相B,进行梯度洗脱。
    时间 流动相A 流动相B
    0分 90% 10%
    5分 80% 20%
    45分 40% 60%
    50分 40% 60%
       取对照品溶液和供试品溶液各25μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,供试品的肽图谱应与对照品的肽图谱一致。
       本品为重组DNA技术生产的由51个氨基酸残基组成的蛋白质,宿主细胞为大肠杆菌。按干燥品计算,每1mg含重组人胰岛素不得少于27.5单位。重组人胰岛素中残余宿主DNA和宿主细胞蛋白质为与生产过程相关的、潜在的特异性杂质,必须在生产过程中严格控制,其限度应符合有关规定。

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