首先人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的化合物,且化合物连接上产色物质,在检测过程中产色物质可被解离下来,使被检样品中出现颜色变化,根据颜色变化可推算出被检凝血活酶的活性。产色物质一般选用连接对硝基苯胺(PNA)。游离的PNA呈黄色,其测定波长选用405nm。在这一波长下,其它物质对光的吸收小于PNA对光吸收的1%。具体检测方法即可采用动态法、也可采用终点法。动态法即是连续记录样品的吸光度变化,算出单位时间吸光度的变化量,并以每分钟吸光度的变化来报告结果。终点法即是指在活性酶同产色物质作用一段时间后,加入乙酸终止反应,检测此段时间内吸光度的变化,进而推算出待检酶的活性。凝血仪上多数采用动态法,因为它比终点法简单、结果更为准确。其优点主要表现在:
用酶学方法直接定量、测定结果准确、重复性好、便于自动化和标准化、所需样品量小。
凝血仪使用产色物质在检测血栓/止血指标时大致可分成三种模式。
①对酶的检测:
即在含酶的样品中直接加入产色物质,因为酶可裂解产色物质释放PNA,监测由于PNA释放而导致被检样品在405nm处光吸收的变化,就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测。
②对酶原的检测:
要对某种酶原进行测定,必须先用激活剂将其激活,使其活化位点暴露,才可将产色物质上的PNA裂解下来。加入的激活剂必须过量,因为只有这样才能使酶原被全部激活,酶原的量才会同样品中酶的活性成一定的数量关系。样品中酶的活性可通过PNA释放,即样品吸光度的变化反应出来,由此则可推算出样品中酶原的含量。
③对酶抑制物的检测:
首先往待检样品中加入过量对应的酶中和该抑制物,剩余的酶可裂解产色物质释放PNA,监测由于PNA释放而导致光吸收的变化,就可测出酶的活性,进而可推算出样品中抑制物的含量。如对抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)等。
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发色底物 | 商品名 | 注册名 | 货 号 | 规 格 |
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BIOPHEN CS-11(22) | S-2222 | 229015 | 25mg | |
Activated Protein C (aPC) | BIOPHEN CS-21(66) | S-2366 | 229021 | 25mg |
Kallicrein | BIOPHEN CS-31(02) | S-2302 | 229031 | 25mg |
Plasmin / Plasminogen-SK | BIOPHEN CS-41(03) | S-2403 | 229041 | 25mg |
Factor IXa | BIOPHEN CS-51(09) | - | 229051 | 25mg |
Urokinase | BIOPHEN Cs-61(44) | S-2444 | 229061 | 25mg |
tPA and broad spectrum | BIOPHEN CS-05(88) | S-2288 | 229091 | 25mg |