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  • 选择合适的细胞分离试剂盒

    中国教育装备采购网 2014/9/4 9:18:00 围观1116次 我要分享

    从样品中分离提纯同种细胞,是许多下游应用的关键一步,分离得到的细胞可以用于基因鉴定、细胞计数、生化分析、蛋白分离、宿主-病原体互作以及细胞间相互作用等研究。

    一款合适的细胞分离试剂盒可以说是实验成功的保障,因为只有获得正确的细胞,下游的分析结果才可能准确。目前,市面上有多种多样的分离试剂盒可供选择,它们的主要区别在于分离方法和筛选标志。那么,如何选择最适合自己的细胞分离试剂盒呢?希望本文能为你提供一些帮助。

    正向选择VS负向选择

    细胞分离试剂盒的工作原理主要有两种,正向选择和负向选择。正向选择的试剂盒,使用与目标细胞直接结合的抗体来进行捕获。这种抗体通常与磁珠相连,可以利用磁铁将悬液中的抗体-磁珠-细胞复合物提取出来,再通过二抗将磁珠与目标细胞分开。负向选择的试剂盒也采用类似的抗体包被磁珠,不过这种试剂盒是通过去除样品中的非目的细胞,来间接捕获目的细胞。

    这两种细胞分离试剂盒如何取舍,主要取决于目标细胞的表面是否具有特异性强的筛选标志。这样的筛选标志能够实现特异性的捕获,避免所获得的细胞被非目标细胞污染。如果你的目标细胞刚好具有这样的筛选标志,那么正向选择的细胞分离试剂盒就是最佳选择。但如果目标细胞并不具有特异性强的筛选标志,那我们最好还是选用负向选择的细胞分离试剂盒。

    筛选标志的确定

    通过数据库中的文献,我们一般可以确定在目标细胞上表达的筛选标志。如果文献中找不到适合自己的表面标志,我们还可以用目标细胞的DNA序列进行BLAST搜索。BLAST搜索结果会显示,目标细胞上可能表达的表面标志,在此基础上可以选取用于捕获的细胞表面蛋白。举例来说,对一个T细胞进行BLAST搜索,结果会显示该细胞是否表达CD4或CD8。在得知目标细胞表达CD4之后,我们可以先对样品进行一个免疫实验(如ELISA),以检验BLAST搜索的结果。一旦证实目标细胞的确表达CD4,我们就可以用相应试剂盒来筛选CD4阳性的T细胞。

    一般流程

    对于一个旨在分离CD4阳性T细胞的试剂盒来说,操作流程主要有以下几步。首先,将样品与anti-CD4抗体包被的磁珠共同孵育,使抗体与CD4+ T细胞结合。然后洗去不需要的非目标细胞(即不表达CD4的细胞),留下磁珠-抗体-细胞复合物。将上述复合物与能结合anti-CD4抗体的二抗一起孵育,二抗就会替代CD4+T细胞,形成磁珠-抗体-二抗复合物。我们可以用磁铁去除这种磁珠-抗体-二抗复合物,而所有的CD4+细胞留在上清中。最后,只需将上清转移就可以进行下游研究了。

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