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    中国教育装备采购网2014-09-04 09:20围观951次我要分享我要投稿

    实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在 37℃溶解);试剂或样品稀释时, 均需混匀,混匀时尽量避免起泡.实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数.

    1. 加样:分别设空白孔,标准孔,待测样品孔.空白孔加样品稀释液 100μl,余孔分别加标 准品或待测样品 100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应 120 分钟.为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液.

    2. 弃去液体,甩干,不用洗涤.每孔加检测溶液 A 工作液 100μl(在使用前一小时内配制) , 酶标板加上覆膜, 37℃反应 60 分钟.

    3. 温育 60 分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板 3 次,每次浸泡 1-2 分钟,大约 400μl/每孔, 甩干(也可轻拍将孔内液体拍干).

    4. 每孔加检测溶液 B 工作液 (同检测 A 工作液) 100μl,酶标板加上覆膜 37℃反应 60 分钟 .

    5. 温育 60 分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,每次浸泡 1-2 分钟,350μl/每孔,甩干 (也可轻拍将孔内液体拍干).

    6. 依序每孔加底物溶液 90μl,酶标板加上覆膜 37℃避光显色(30 分钟内,此时肉眼可见标 准品的前 3-4 孔有明显的梯度兰色,后 3-4 孔梯度不明显,即可终止).

    7. 依序每孔加终止溶液 50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色.终止液的加入顺序应尽量与 底物液的加入顺序相同. 为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液

    8. 用酶联仪在 450nm 波长依序测量各孔的光密度(OD 值). 在加终止液后立即进行检测.

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