猪蓝耳 PRRS ELISA试剂盒使用说明书

中国教育装备采购网2014-09-29 10:37围观1019次我要分享

  使用目的:

  本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中猪蓝耳(PRRS)表达。

  实验原理

  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪蓝耳(PRRS)表达。用纯化的猪蓝耳(PRRS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中猪蓝耳(PRRS)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的猪蓝耳(PRRS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中猪蓝耳(PRRS)的存在与否。

  试剂盒组成

  130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

  2酶标试剂6ml×1瓶8阳性对照0.5ml×1瓶

  3酶标包被板12孔×8条9阴性对照0.5ml×1瓶

  4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

  5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

  6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

  标本要求

  1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

  2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步骤

  1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

  2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

  3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

  5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7. 温育:操作同3。

  8. 洗涤:操作同5。

  9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

  10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  操作程序总结:

  计算和结果判定:

  试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

  临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为猪蓝耳(PRRS)阴性

  阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为猪蓝耳(PRRS)阳性

  。

  注意事项

  1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

  2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  5.底物请避光保存。

  6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

  7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。

  保存条件及有效期

  1.试剂盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6个月

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