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  • 如何采用酶标法(ELISA)进行三聚氰胺检测?

    中国教育装备采购网 2015/1/14 15:41:00 围观1093次 我要分享


      Thermo MK3型酶标仪

      本实验方案采用Thermo Scientific的Multiskan MK3型酶标仪和Wellwash 4MK2型洗板机(由北京平利洋公司提供),,结合Abraxis三聚氰胺检测试剂盒,以竞争法测抗原的原理对液态奶或奶粉中的三聚氰胺进行检测分析。

      一、样品准备

      巴氏消毒全脂奶(液体):

      1)用稀释液以1:10的比例稀释牛奶样品,如在900 μl的稀释液中加入100 μl牛奶。

      婴幼儿配方奶粉:

      1)按照配方奶粉的说明,以稀释液溶解奶粉,如用60 ml稀释液溶解8.6克奶粉。

      2)用稀释液以1:5的比例稀释奶粉溶液

      二、样品检测

      1)试剂使用前,应使其温度恢复至室温(25±2℃)

      2)吸取100 μl标准品(0, 20, 50, 100, 200和500 ppb)和准备好的样品加入相应的微孔中。然后,每孔再加入50 μl的三聚氰胺HRP酶标记物。

      3)利用MK3酶标仪的振荡功能,振板60秒,并在室温下孵育30分钟。

      4)孵育完后,将微孔板转移到Wellwash 4MK2洗板机上进行洗板,每孔加250 μl洗液,洗板四次。

      5)每孔加入100 μl显色底物溶液,避光孵育20分钟。

      6)每孔加入100 μl终止液,终止显色反应。

      7)在MK3酶标仪上读板,测量波长450nm。

      三、结果分析

      1)以浓度为0 ppb标准品的吸光值为基准(B0),归一化标准品的检测吸光值B/B0(B指除B0以外的标准品吸光值)。

      2)绘制以标准品的B/B0为Y轴坐标、对应的标准品浓度为X轴坐标的散点图。

      3)对该散点图进行直线拟合。以该拟合曲线的直线方程对待测样品浓度进行计算。

      4)如果样品吸光值大于最小标样的吸光值,则该样品的浓度<20 ppb;如果样品吸光值小于最大标样的吸光值,则样品的浓度>500 ppb。

      5)结合稀释倍数,计算最终液态奶或奶粉中的三聚氰胺浓度,如液态奶稀释倍数是10倍。

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