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  • 液相色谱仪的使用方法

    中国教育装备采购网2015-07-10 10:05围观1108次我要分享我要投稿

      液相色谱仪的品牌、种类很多,各家的使用方法也不尽一样,主要看你是那一款的液相色谱仪,当初购买设备时,厂家的工程师会培训使用方法。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等;液相色谱-红外光谱连用也发展很快如在环境污染分析测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使环境污染分析得到新的发展。

      液相色谱仪的使用方法:

      内容:

      1 开机

      1.1 打开电脑。

      1.2 打开液相色谱各个模块的电源。

      1.3 双击桌面“仪器—联机",进入联机界面。

      1.4 排气:

      1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀(逆时针旋转约1圈)。

      1.4.2 右键单击“泵"图标区域,选择“方法…"选项,进入泵编辑画面,设流速:5ml/min(一般为3-5ml/min),点击“确定"。

      1.4.3 右键单击“泵" 图标,点击“控制…"选项,选中“ON",点击“确定",则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,(一般为5分钟),切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止。

      1.4.4 右键单击“泵" 图标,点击“方法…"选项,设流速:0ml/min,手动旋紧冲洗阀。

      1.4.5 右键单击“泵"图标,点击“方法…"选项,按照方法要求选择合适比例的流动相,设流速:1.0ml/min。

      1.4.6 同理右键单击“柱温箱",“检测器"图标,点击“方法…"选项,按照方法的要求设置温度,波长,点击“控制" 选项,“ON"打开柱温箱和检测器。

      2 编辑方法

      2.1 点击“方法"-“编辑完整方法"开始编辑完整方法。

      2.2 选中除“数据分析 "外的三项,进入下一选项卡。

      2.3 方法信息:在“方法注释"中加入方法的信息(如:This is for test!)。进入下一选项卡。

      2.4 泵参数设定:在“流速"处输入流量, 如1.0ml/min,停止时间:如10 min(该停止时间仅为做一个样品需要的时间),按照要求选择合适比例的流动相配比,如乙腈:水=75:25,A为水,B为乙腈,则设置B:75%即可。进入下一选项卡。

      2.5 自动进样器参数设定: 选择“洗针进样"----可以输入进样体积和洗瓶位置,进入下一选项卡。

      2.6 柱温箱参数设定: 在“温度"下面的空白方框内输入所需温度,如:40度。进入下一选项卡。

      2.7 UV检测器参数设定: 在“波长"下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm。点击确定。

      2.8 在“ 运行时选项表 "中,选中“ 数据采集",点击“确定"。

      2.9 从“方法"菜单,选中“方法另存为…",输入一方法名,如“测试",点击“确定。

      3 单次采集

      3.1 从“运行控制"菜单中,选择“样品信息"选项,选择合适的路径,在“数据文件"中选择 “前缀/计数器",输入样品瓶的位置,点击“确定"。

      3.2 基线平稳后约10分钟,从“运行控制"菜单中选择“运行方法"。

      4 多次数据采集

      4.1 按照步骤2 编辑完整方法。

      4.2 点击“序列"-“序列表",输入“样品瓶"“样品名称",“进样次数",选择合适的“做样方法"

      4.3 点击“序列"-“序列参数",选择序列数据的保存路径(序列会自动生成以“序列名称-时间"为名称的文件夹保存数据),数据建议以选择 “前缀/计数器"保存。

      4.4 从“序列"菜单,选中“序列另存为…",输入一序列名,如“测试",点击“确定。

      4.5 从“运行控制"菜单中选择“运行序列"。

      5 数据分析(脱机状态使用)

      5.1 双击“仪器 —脱机"图标 进入的脱机画面。

      5.2 从“视图"菜单中,点击“数据分析"进入数据分析画面。

      5.3 从“文件"菜单选择“调用信号",选中您的数据文件名。点击“ 确定",则数据被调出。(如预建立标准曲线,应先打开浓度较低的标样图谱。)

      5.4 做谱图优化:从“图形"菜单中选择“信号选项"。从“范围" 中选择“满量程" 或“自动量程" 及合适的时间范围或选择“自定义量程" 调整。反复进行,直到图的比例合适为止。点击“ 确定"。

      6 积分:

      6.1 从“积分"菜单中选择“积分事件"选项,选择合适的“斜率灵敏度",“峰宽",“最小峰面积",“最小峰高"。点击 ,自动加载积分参数。

      6.2 点击左边“√"图标,将积分参数存入方法并退出“积分事件"。

      6.3 如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。

      7 标准曲线

      7.1 点击“校正"-“校正设置",输入“含量单位"。

      7.2 点击“校正"-“新建校正表",点击确定。输入“化合物名称"和“含量",点击“确定",按照提示删除其他组分。

      7.3 至此完成单级校正,如要增加校正级别,应从“文件"菜单选择“调用信号",选中您的数据文件名(第二个标样),点击“校正"-“添加级别",点击确定,输入“含量",依次增加校正级别。

      8 打印报告

      8.1 从“报告"菜单中选择“设定报告"选项,点击“定量结果"框中“定量"右侧的黑三角,选中“外标法",其它选项不变,点击“ 确定"。

      8.2 从“报告"菜单中选择“打印报告",则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则点击“报告" 底部的“打印"钮。

      8.3 点击“文件"-“另存为"-“方法",把数据分析方法保存,下次分析可直接在“文件"-“调用"-“方法"下,将该方法调出使用。(调用的方法中含有积分方法,标准曲线方法和打印报告方法)

      9 关机

      9.1 关机前,先关紫外灯,用相应的溶剂(甲醇或乙腈)充分冲洗系统大约30分钟。(色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中)

      9.2 退出化学工作站,依提示关泵,及其它窗口,关闭计算机。

      9.3 关闭Agilent 1260各模块电源开关。

      10 其它注意事项

      10.1 当样品运行时,切勿打开自动进样器前遮盖,否则进样过程停止。

      10.2 系统发生漏液时,机器会检测到并停止进样,状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处,擦干漏液传感器,单击ON按钮,系统重新初始化。

      10.3 注意紫外灯使用寿命,切勿来回开关紫外灯。

      高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合,HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

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