一、验证目的
通过对培养基的灵敏度验证来增加无菌检查的可信度
二、原理
不同种培养基内加入符合其生长条件的已知菌株做生长实验，根据加入定量细菌的生长情况来评价改培养基灵敏度。菌量越少说明培养基灵敏度越高。
三、仪器设备
无菌室（操作间净化级别小于10000级，局部净化小于100级，室温18-26℃，相对湿度40-60%）、恒温培养箱（30-35℃）、恒温培养箱（20-25℃）、高压灭菌器、干烤箱（250℃）、相差显微镜等。
培养基：需气菌、厌氧菌培养基（硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基（改良马丁培养基）上海创赛科技提供改良马丁培养基，商品编号：C015222-250g，价格80元。
测试菌种：金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌、生孢梭菌。上海创赛科技提供金黄色葡萄球菌显色培养基，BR ，商品编号：D16-1028481-500g，询价。
四、验证实施
1、培养基配置：
分别称取硫乙醇酸盐培养基7.5克，改良马丁培养基7.0克，分别加250ml蒸馏水，热溶解，分装10ml/管，高压灭菌116℃，20分钟。上海创赛科技提供液体硫乙醇酸盐培养基，商品编号：C015190-250g，价格115元。
2、测试均的培养：
在无菌操净台内，分别取金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、生孢梭菌菌液少量，接种在硫乙醇酸盐流体培养基（10ml/管）中，在30-35℃培养24小时；取白色念珠菌菌液少量，接种在改良马丁培养基中，在20-25℃培养24小时，此时的培养液称为原菌液。上海创赛科技提供蛋白酶（枯草杆菌），9014-01-1，BR,150u/mg，商品编号：D23-RM1036-1g，价格480元。
3、测试菌计数：采用原菌培养液直接稀释、计数板计数法
①分别取已经培养好的原菌液1ml，用生理盐水稀释10倍
②用一片干净的盖玻片在一干净计数玻片上
③吸少量含菌培养液接触盖玻片的边缘
④在相差显微镜400倍下观察，并且按一小方块所见的每一个细菌大约相当2x107细菌/ml计算细菌浓度。
4、原菌液稀释：
将上述原菌液根据细菌计数结果，分别用生理盐水稀释至10~100个菌/ml。
5、灵敏度实验：
分别将4稀释菌液1ml接种到1配置的10ml/管培养基中，每种菌液接种3管培养基，以未接种的培养基为阴性对照，按规定的条件培养5天，并逐日记录。上海创赛科技提供念珠菌BCG琼脂基础，Candida BCG Agar Base ，商品编号：BD-283510-500g，价格3070.06元。
6、结果判定：
一每种菌液接种的培养基不得少于2管呈阳性。即该培养基的灵敏度符合要求。
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