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免疫共沉淀方法进行蛋白质检测的优缺点

教育装备采购网 2016-10-20 10:33 围观1160次

  免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

  当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。

  优点:

  1.于天然状态下相互作用的蛋白质。

  2.蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响。

  3.分离得到相互作用蛋白的天然符合物。

  缺点:

  1.低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用可能检测不到。

  2.两种蛋白质的结合可能有第三者参与,而非直接结合。

  实验前预测可能的结合蛋白非常重要,以此选择最后检测的抗体,若预测不准确,实验就得不到结果,方法本身存在风险

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