1. 提前制备好相应数量的Feeder;
2. 准备37-39℃的热水，从液氮罐中取出所需冻存管(冻存细胞)，迅速投入热水中，迅速剧烈摇动直至冻存液全部融化;上海创赛科技提供细胞冻存管，Freezing Tubes，商品编号：C81-FCT002005-0.5ml，锥形底,已消毒 5000支/箱，价格3272元。
3. 转入无菌间，1000转/分钟离心5-10分钟;
4. 弃上清，加入1 ml ES培养液轻轻吹打重悬，转入铺有饲养层细胞的培养皿中(冻存前细胞来自多大的培养皿，复苏时就用相应大小的培养皿)，补加适量培养液;上海创赛科技提供9.0CM一次性细胞培养皿，平底灭菌，适合细胞贴壁生长 ，商品编号：C81-TCD010090-500个/箱，价格787.5元。
5. 转入培养箱培养，次日换液;此后每24小时换一次液，每48小时传一次代(视生长情况)。
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