一、实验原理:
T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)、抗CD2和抗CD3McAb 作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;上海创赛科技提供刀豆蛋白A IV,ConA Type IV,11028-71-0,商品编号:B11000088-25mg,价格118.3元。
而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞发生增殖;肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖有刺激作用。最近发现,integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞。根据形态学或氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入率测定T细胞的增殖水平。上海创赛科技提供脂多糖,LPS (Lipopolysaccharides),商品编号:B11000282-10mg,价格269.5元。
二、材料及试剂
1、培养基:RPMI-1640或TC199培养液
2、PHA;同形态学方法
3、小牛血清;上海创赛科技提供标准小牛血清 ,商品编号:C21-1511-100ml,价格135元。
4、3H-TdR;选用比活性为2Mci~10Mci/mg分子的制品,将1Mci/ml溶液以生理盐水稀释成100uci/ml,于4℃保存备用。临用时再用培养液稀释成10uci/ml溶液。
5、3%冰醋酸
6、浓甲醛
7、30%H2O2液
8、闪烁液:以下试剂混合即可。
PPO(2,5二苯基噁唑); 5.00g
POPOP[1,4-双(5-苯基噁唑基-2苯; 0.30g
无水乙醇; 200.00ml
甲苯; 800.00ml
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