梯度离心是待分离的物质在具有密度梯度的介质中进行的离心。梯度离心可分为两种,即密度梯度离心(又称沉降速度离心、速度区带离心或差速区带离心)和平衡密度梯度离心(等密度梯度离心和沉降平衡离心)
1.密度梯度离心
密度梯度离心(Density gradient centrifugation)是在密度梯度介质中进行的一种沉降速度离心。常用有机物如蔗糖或甘油来制作梯度。梯度的作用是使离心液稳定以减少扩散或得到较为锋利的区带。被离心的物质根据其沉降系数不同进行分离,同类物质则因分子大的沉降速度快于分子小的物质(见公式5)从而得到分离(图5-1)。
密度梯度离心和差速离心一样是依赖时间的,离心时间过长已经分离的物质均可沉到管底或某一介质密度区域(图5-2)。
2.平衡密度梯度离心
平衡密度梯度离心(Equilibrium Density Gradient Centrifugation)虽然也是在密度梯度介质中进行的离心,但被分离的物质是依靠它们的密度不同进行分离的,此种离心常用无机盐类(如氯化铯CsCl)制作密度梯度。在梯度介质中,当被分离的物质分别达到与其密度相同的介质部位时就不再移动,从而达到分离的目的(图5-3)。例如,DNA在平衡密度梯度离心过程中,停留在密度梯度为1.7g/cm的位置,而RNA停止在1.9g/cm 的部位。由此可见平衡密度梯度离心是不依赖于时间的,只要梯度不破坏,时间延长不影响分离(图5-3)
常用词汇
离心Centrifugation
离心机Centrifuge
超速离心机Ultracentrifuge
差速离心Differential Centrifugation
沉降系数Sedimentation Coefficient
密度梯度离心Density Gradient Centrifugation
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