【基本原理】
核酸分子中含有碱基使核酸在260nm 下有最大吸收。紫外吸收是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的性质,含有嘌呤和嘧啶的物质,不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。
蛋白质由于含芳香族氨基酸,因此也能吸收紫外光,通常蛋白质在280nm 波长有特异吸收。因此核酸在A260 及A260、A280 测定的比值(A260/A280)可以反映样品中核酸的含量及纯度。RNA在A260/A280的比值在2.0 以上;DNA在A260/A280的比为1.8左右。当样品中蛋白质含量较高时比值即下降。
【器材】
1.紫外分光光度计
2.紫外灯或凝胶成像仪
【试剂】
1.双蒸水
2.DNA样品或RNA样品
【操作步骤】
1.将样品加适量水或TE稀释。
2.用1ml 水(或TE)做空白调零。
3.把样品杯放入分光光度计比色槽中。
4.测A260吸光值,计算出样品DNA或RNA含量。
5.如检测样品纯度,还要再测A280 值,并计算二者比例,若比例为1.6 左右,说明有蛋白质或其他吸收此波长的杂质在其中,建议再用酚/氯仿抽提,继以乙醇沉淀以除去杂质。
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