【基本原理】
琼脂糖凝胶电泳是分离、纯化、鉴定DNA片段的常用方法,具有简便、快速的优点。DNA琼脂糖凝胶电泳的原理与蛋白质的电泳原理基本相同,DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。DNA 分子在电场中通过介质而泳动,除电荷效应外,凝胶介质还有分子筛效应,与分子大小及构象有关。对于线性DNA 分子,其电场中的迁移率与其分子量的对数值成反比。在凝胶中加入少量溴化乙锭,其分子可插入DNA的碱基之间,因此可在紫外灯下直接观察到DNA片段在凝胶上的位置,并可在紫外灯下或经凝胶成像系统观察或拍照。
【器材】
1.水平电泳槽
2.电泳仪
3.紫外灯或凝胶成像仪
【试剂】
1.1%琼脂糖
2.电泳缓冲液(1×TAE)
3.10mg/ml EB
4.电泳样品上样缓冲液:0.25%溴酚蓝, 0.25%二甲苯腈FF, 40%(W/V)蔗糖水溶液4℃保存。
【操作步骤】
1.称0.2g琼脂糖,加20ml电泳缓冲液(1×TAE)加热熔化。
2.胶液冷至60℃时,加EB 20μl,小心混匀,缓慢倒入制胶模具中,在胶一端插上梳子。
3.待胶凝固后,拨出梳子,将模具置于电泳槽中,加入1×TAE,让液面高于胶面1mm。
4.在DNA样品中加入1:5的上样缓冲液,上样。
5.接通电源,1-5V/cm电压,开始电泳。
6.据指示剂迁移位置,判断是否终止电泳。切断电源后,取出凝胶,紫外灯下或经凝胶成像系统观察或拍照。
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