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  • 上海古朵:ELISA试剂盒标准操作步骤

    中国教育装备采购网2017-06-26 16:58围观324次我要分享我要投稿

      ELISA标准操作要点:

      优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的高质量的纯化水电导率小于1.5μs/cm。

      1.加样

      加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出。

      2保温

      在建立ELISA方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经

      1-2 小时,产物的生成可达顶峰。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,反应板不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的试剂盒温育是在空气浴中完成,采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应,边上的值会偏高,建议为了客观的判断结果,将质控放在非边缘位置。

      3洗涤

      洗涤在ELISA 过程中虽不是一个反应步骤,但却决定着实验的成败。ELSIA 就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA 操作中,洗涤是最主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。

      洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的,非离子型洗涤剂既含疏水基团,也含亲水基团,其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合,从而削弱蛋白质与固相载体的结合,并借助于亲水基团和水分子的结合作用,使蛋白质回复到水溶液状态,从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20,其浓度可在0.05%-0.2%之间,高于0.2%时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。

      洗板时注意各种试剂盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀释,应按要求稀释,所用的水电导率最好在1.5us/cm 之下,洗液如果结晶应待其融解后配制。保证洗板浸泡时间为40 秒左右,孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好,手工洗板防止洗液在孔内形成气泡。

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