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上海古朵介绍:凝血酶原时间(PT)测定实验

教育装备采购网 2017-07-31 16:14 围观434次

  待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶,重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子成为X成为Xa。后者使凝血酶原转变为凝血酶,凝血酶使纤维蛋白原转变为凝血不溶性纤维蛋白,测定凝固所需时间、即为待测血浆凝血酶时间(PT)、PT测定是外源性系统理想和常用的筛选实验,也可作为外源性途径凝血固定做定量试验,同时也可用于口服抗凝剂治疗的监控。标本的来源与保存:

  静脉采血,置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中,轻轻颠倒混匀。3000rpm(或25O0)离心15分钟,收集上层液(血浆,黄色),标本在不同条件下保存时间如下:-80℃保存,不宜超过3O天,一20℃保存,不宜超过14天,2一8℃保存,不宜超过6小时,22-24℃保存,不宜超过2小时测定。

  实验步骤

  1. 试剂重建:

  于保存每瓶PT试剂加人2.0ml蒸馏水轻摇溶解。注意:试剂溶解后2-8℃可保存7天,室温(15-25℃)可保存24小时,勿冻结。

  2. 手工测定:

  取待测血浆(参比血浆)0.1ml.37℃孵育2分钟,加入37℃预温凝血活酶0.2ml;混匀,立即启动秒表,记录凝固时间,即为PT值。

  3. 血凝仪测定:

  请按仪器提供的参数操作

  正常值:

  1. 以时间表示11-15秒

  2. 以PTD表示0.95-1.24

  3. 以INR表示0.94-1.30

  注意事项

  l. 采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器,贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管不宜使用普通玻璃管,避免凝血因子活化。

  2. 采血时止血带不可束缚过紧并不应超过5分钟,否则导致凝血及纤溶因子活化。

  3. 血液应立即加抗凝剂,血浆制备必须及时,血浆分离应尽快去除血小板血浆分离后应尽快测定。

  4. 血浆预温不宜超过10分钟。

  5. 凝血活酶预温不宜超过30分钟。

  6. 用浊度法测定终点的自动化凝血仪,溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果,此时宜用手工法或电子机械或凝血仪测定。

  7. 红细胞比容超过55%或小于20%时,应调整抗凝剂用量,抗凝剂体积(ml)=0.00185×血液体积(ml)×(100-比容)。

  8. 不宜使EDTA·Na2. 肝素,草酸盐抗凝,应使用0.109mol/L拘橼酸钠抗凝。

  9. 一80℃及一20℃保存样品,测定时37℃迅速融化,不可反复冻融。

  10. 样品采集避免溶血及组织液污染。

  11. 建议各实验室建立自己的参考值范围。

  12. 手工操作时,凝血酶原时间的终点计算以出现混浊的初期凝固为准。

  13. 测定温度36.5-38.5℃过低或过高温度均使PT延长。

来源:教育装备采购网 作者:上海古朵 责任编辑:李瑶瑶 我要投稿
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