鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法解决方案
参考标准《GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 高效液相色谱-质谱质谱法》
目前有关妥布霉素检测的文献和标准较少,主要参考标准《GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 高效液相色谱-质谱质谱法》;高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)具有高灵敏度和高特异性,适用于基质复杂、样品组分含量很低的兽药残留的确证分析。
方法优势
迪马科技开发的《鱼肉中妥布霉素的检测》:
(1) 采用三氯乙酸水提取、ProElut PXC固相萃取柱净化和超高效液相色谱-质谱法检测;
(2) 具有前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好、净化效果优异等特点;
(3) 使用氰基液相色谱柱进行分析,峰形和保留时间均符合要求;
(4) 过柱方法简单易操作,对操作人员要求不高,检测成本相对较低;
(5) 定量限是20 μg/kg,与国标方法一致。
鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法
1、适用范围
本方案适用于鱼肉中妥布霉素检测。本方法定量限是20.0 μg/kg。
2、 标准品配制
(1) 单标储备液1000 μg/mL,准确称取妥布霉素,用水配制成1000 μg/mL的储备液。
(2) 中间液10.0 μg/mL,吸取适量单标储备液1000 μg/mL,用水配制成10 μg/mL的中间液。
3、提取
(1) 称取样品(鱼肉)5.0 g(精确至0.05 g),置于50mL离心管中。加入20 mL三氯乙酸水(25 g/L)和2 mL二氯甲烷,涡旋分散,振荡5 min,8000 r/min离心2min,收集上清液;
(2) 在上清液中加入5 mL乙腈混匀,8000 r/min离心2 min,待净化(离心为了去除乙腈水溶解时产生的气泡)。
4、净化—— ProElut PXC 60 mg/3 mL(Cat.# 68203)
(1)活化:
依次加入3 mL甲醇,3 mL水,流出液弃去;
(2)上样:
将上样液加入柱中,流出液弃去;
(3)淋洗:
(4)洗脱:
依次用5 mL水、3 mL甲醇淋洗,流出液弃去;
3 mL 20%氨水甲醇洗脱,收集洗脱液;
(5)定容:
将洗脱液在40 ℃水浴下通入氮气吹至0.2 mL,然后用流动相重新定容至0.5 mL,上机分析。
同方法制备基质匹配标准溶液。
5、色谱条件
UPLC 条件:
色谱柱:Platisil CN,150 x 4.6 mm,5 μm (Cat.# 99506)
流 速:0.5 mL/min
进样量:5 μL
柱 温:35 ℃
流动相: A:3%甲酸水 B:3%甲酸乙腈 A:B=9:1
质谱条件:
电离模式:ESI |
扫描方式:正离子扫描 |
检测方式:多反应监测 |
电喷雾电压:5500 V |
雾化气压力:60 psi |
辅助气压力:60 psi |
气帘气压力:20 psi |
离子源温度:550 ℃ |
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
药物名称 |
定性离子对 (m/z) (母离子/子离子) |
定量离子对 (m/z) (母离子/子离子) |
碰撞气能量/eV |
去簇电压/V |
妥布霉素 |
468.2/163.1 |
468.4/163.2 |
35 |
70 |
468.4/144.8 |
25 |
|||
468.4/205.3 |
30 |
|||
468.2/324.1 |
20 |
6、添加回收结果
鱼肉中妥布霉素检测的添加回收结果(%)
|
回收率(%) |
||
添加浓度为20 μg/kg,加标量:10 μg/mL,加10 μL |
|||
龙利鱼 |
鲫鱼 |
鳗鱼 |
|
妥布霉素 |
89.2 |
95.3 |
93.7 |
|
妥布霉素标准品0.2 μg/mL的MRM色谱图
鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息
货号 |
名称 |
规格 |
样品前处理 |
||
68203 |
ProElut PXC |
60 mg/3 mL 50/pk |
244358 |
12管防交叉污染真空SPE萃取装置 |
12位 |
4803 |
1,3,6 mL柱管通用连接器 |
15/pk |
4806 |
考克(控制流量) |
15/pk |
99011 |
真空/正压两用泵,无油 |
1/pk |
99013 |
抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米, 2 L抽滤瓶及橡胶塞) |
1/pk |
30039 |
FitMax针头式过滤器 Nylon |
13 mm, 0.22 μm 100/pk |
30040 |
FitMax针头式过滤器 Nylon |
13 mm, 0.45 μm 100/pk |
色谱柱及保护柱 |
||
99506 |
Platisil CN色谱柱 |
150×4.6 mm,5 μm |
HPLC溶剂�缓冲盐�离子对试剂 |
||
50102 |
甲醇 HPLC级 |
4 L |
50101 |
乙腈 HPLC级 |
4 L |
50117 |
二氯甲烷 HPLC级 |
4 L |
50144 |
甲酸 HPLC级 |
50 mL |
通用色谱产品 |
||
52401B |
瓶架/蓝色 |
50孔 |
52401A |
瓶架/白色 |
50孔 |
1034 |
样品瓶(棕色/螺纹) |
2 mL, 100/pk |
1035 |
样品瓶盖/含垫(已经组装) |
100/pk |
H80465 |
HPLC 进样针 |
25 μL |
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