分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源
光度定义
分光光度法是在定波长处或定波长范围内光的吸收度,对该物质行定性或定量分析。常用的波长范围为:(1)200~380nm的紫外光区,(2)380~780nm的可见光区,(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的密度和准确度,所有仪器应按照家计量检定规程或本附录规定,定期行校正检定
仪器组成
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
原理
分光光度计采用个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生定波长的光源,光线透过测试的样品后,分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式:
A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 为吸光度;
I。为入射的单色光强度;
I 为透射的单色光强度;
T 为物质的透射率;
k 为摩尔吸收系数;
L 为被分析物质的光程,即比色皿的边长;
仪器点
的双光路、双光束光学系统,仪器分辨率更,杂散光更低,稳定性、可靠性更强,分析更加准确
采用320*240位点阵式亮6 "液晶显示器,显示清晰,信息备
的长光程光路设计,使仪器分辨率更,尤其适合微量测试 强大的数据处理能,使测试结果能得到充分的应用,用户编辑更为简单快捷
采用悬架式光学系统设计,整体光路立固定在16mm厚的铝制无变形基座上,底板的变形和外界的震动对光学系统不产生何影响,从而大大提了仪器的稳定性和可靠性
采用同步正弦机构,波长准确度,重复性好
采用ARM系统
0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六档光谱带宽自动可选,满足不同用户的测量需求
24位速、度A/D转换,仪器度更、反应速度更快
主要元件采用口配置,使仪器杂散光更低、稳定性、可靠性更强
能更加强大,主机可立成光度测量、定量测量、光谱扫描、动力学、DNA/蛋白质测试,多波长测试及数据打印等能
操作方法
1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。
2.将灵敏度开关调至"1"档(若零点调节器调不到"0"时,需选用较档。)
3.根据所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘针向t=0处。
6.盖上暗箱盖,调节"100"调节器,使空白管的t=100,针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
7.比色毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
注意事项
1.该仪器应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
2.使用本仪器前,使用者应该了解本仪器的结构和作原理,以及各个操纵旋钮之能。在未按通电源之前,应该对仪器的安性能行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
3.在仪器尚未接通电源时,电表针须于"0"刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝行调节。
日常维护
分析仪器作者要懂得仪器的日常维护和对主要术标的简易测试方法,自己经常对仪器行维护和测试,以保证仪器作在佳状态。
、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。他们可以引起机械件的锈蚀,使金属镜面的光洁度下降,引起仪器机械分的误差或性能下降;成光学件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀,产生光能不足、杂散光、噪声等,甚至仪器停止作,从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加以校正。应具备四季恒湿的仪器室,配置恒温设备,别是地处南方地区的实验室。
二、环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的可靠性,也是成须学件铝膜锈蚀的原因之。因此须定期清洁,保障环境和仪器室内卫生条件,防尘。
三、仪器使用定周期后,内会积累定量的尘埃,好由维修程师或在程师导下定期开启仪器外罩对内行除尘作,同时将各发热元件的散热器重新紧固,对光学盒的密封窗口行清洁,要时对光路行校准,对机械分行清洁和要的润滑,后,恢复原状,再行些要的检测、调校与记录。
折叠编辑本段维护保养
分光光度计作为种密仪器,在运行作过程中由于作环境,操作方法等种种原因,其术状况然会发生某些变化,可能影响设备的性能,甚至诱发设备故障及事故。因此,分析作者须了解分光光度计的基本原理和使用说明,并能及时发现和排除这些隐患,对已产生的故障及时维修才能保证仪器设备的正常运行。
1)若大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新校正"0"和""点。然后再测量。
2)针式仪器在未接通电源时,电表的针须位于零刻度上。若不是这种情况,需行机械调零。
3)比色皿使用毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率。
4)操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯,以免影响光效率。
5)1900型等分光光度计,由于其光电接收装置为光电倍增管,它本身的点是放大倍数大,因而可以用于检测微弱光电信号,而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移,灵敏度下降。针对其上述点,在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下,因此在预热时,应打开比色皿盖或使用挡光杆,避免长时间照射使其性能漂移而导致作不稳。
6)放大器灵敏度换挡后,须重新调零
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