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基因组DNA提取常见问题及注意事项

教育装备采购网 2018-11-07 11:44 围观12511次


  1.待提取样本尽量避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段降解或者DNA得率严重下降;

  2.试剂盒中BufferEB中含有少量EDTA,可能影响下游实验,使用时适当稀释,如果用其他洗脱液洗脱,要确保PH>7.5,PH过低影响洗脱效率;

  3.离心柱漂洗完成后,尽可能烘干柱膜上残留乙醇,残留乙醇会影响洗脱效率和下游实验效果;如果A260/230值过低,说明样本提取过程中,漂洗不彻底,有盐离子残留,建议增加漂洗次数;

  4.对于基因组DNA提取,A260/280值如果低于1.7说明有可能存在蛋白污染,如果值大于1.9,说明可能存在RNA污染;如果洗脱样本时没有使用BufferEB,而使用ddH20,比值或偏低,因为Ph值会影响吸光值,并不表示样本纯度低;

  5.对于植物样本,样本处理量无法统一确定,对于一般样本(烟草,拟南芥等),提取量不超过100mg鲜重组织或者20mg干重组织,对于复杂样本(水稻,玉米,榆树等),建议初始样本量不超过50mg鲜重或者10mg干重组织;如果需要较高的DNA量,可以采取多管浓缩的方法提取DNA;

  6.对于植物样本,如果短时间不能低温处理,建议使用硅胶颗粒干燥样本,防止DNA严重降解;研磨处理材料过程中尽量不要过量,否则会导致DNA产量低;材料过量也会使样本出现团块无法裂解,导致离心柱堵塞,无法获得高质量DNA;

  7.植物组织在降低初始样品量后,仍旧无法改变裂解液体粘稠,离心柱堵塞,DNA得率低,建议使用本公司BufferPL对样本预处理1-3次后在进行提取;

  8.对于血液样本,最好使用新鲜血液样本或者4℃存放少于2天的样本,否则会严重降低DNA产量;尽量避免反复冻融(不超过3-5次),每一次冻融都会降低DNA得率;

  9.对于血液样本,如果样本中含有血块,说明样本收集时未加入血液抗凝剂;建议重新收集样本并加入EDTA,肝素,柠檬酸等抗凝剂;

  10.在使用红细胞裂解液处理血液时,确保血液样本已经恢复到室温状态;处理过程中尽可能混匀样本,防止红细胞裂解不完全;

  11.对于细菌样本DNA提取,试剂盒中的溶菌酶可以裂解大部分革兰式阳性细菌,对于特殊细菌如葡萄球菌,需要提高溶菌酶用量(建议10mg/ml溶菌酶使用量增加一倍)和溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)共同使用;

  12.DNA浓度及纯度判断:[DNA]μg/ml=A260 x稀释倍数x50.0 (50.0:DNA的平均吸收系数);

点击进入北京翔悦环宇科技发展有限公司展台查看更多 来源:教育装备采购网 作者:北京翔悦环宇科技发展有限公司 责任编辑:张肖 我要投稿
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