人抗肝素PF4复合物抗体/HIT抗体(HIT)ELISA试剂盒

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详细说明

人抗肝素PF4复合物抗体/HIT抗体(HIT)ELISA试剂盒

规格: 48T/96T

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说明书以人白细胞介素-2(IL-2)ELISA试剂盒 为例:

人白细胞介素-2IL-2酶联免疫(ELISA)

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称:

通用名:人白细胞介素-2(IL-2)酶联免疫诊断试剂盒

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它相关组织液中白细胞介素-2(IL-2)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-2(IL-2)水平。用纯化的人白细胞介素-2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-2(IL-2),再与HRP标记的羊抗人受体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-2(IL-2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-2(IL-2)含量。

试剂盒组成

1

20倍浓缩洗涤液

50ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品(12μg/L)

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张 

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

标本处理及要求

1.血清、血浆、脑脊液、腹腔液标本可直接测定;

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

3.采集后尽早进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第一孔和第二孔中先各取50μl弃掉;再各取50μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为8μg/L,4μg/L ,2μg/L,1μg/L,0.5μg/L)。

2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.         温育:操作同3。

8.         洗涤:操作同5。

9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.  请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

检测范围:

0.4μg/L -10μg/L

规格:

96人份/盒

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月

 

 

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