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 人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒
  • 人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒
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    参考价格: ¥1030.00
    所在地区:上海
    上架时间:2013年01月26日
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     酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)是目前应用最广泛的免疫学检测技术,人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒是将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合,通过酶作用于底物后的显色反应判定结果。人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒可用目测定性,也可用酶标测定仪测定光密度(OD)值以反映抗原含量,灵敏度可达每毫升纳克(ng)水平甚至皮克(Pg)水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)等。常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法,前者测定可溶性抗原或抗体,后者检测组织或细胞表面抗原。
    【ELISA分类】 ELISA常用的方法主要包括双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA。
    (1)双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。夹心法利用两种一抗对目标抗原进行捕获和固定,在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性,该方法的检测灵敏度可提高到pg级的水平。将已知抗体包被到固相表面,加入待检标本,标本中若含有相应抗原即与固相表面的抗体结合,洗涤去除未结合成分,加入该抗原特异的酶标记抗体,洗去未结合的酶标记抗体,加底物后显色。若标本中无相应抗原,固相表面即无抗原结合,加入的酶标记抗体则不能结合于固相并被洗涤去除,当加入无色底物后,因无酶催化故不显色。双抗体夹心法适用于测定2价或2价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
    (2)间接法 间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。先将待测的蛋白包被在孔板内,然后依次加入一抗、酶标记的二抗和底物显色,通过仪器(例如酶标仪)定量检测抗原。这种方法操作简单但由于高背景而特异性较差,目前已逐渐被夹心法取代。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标二抗建立检测相应抗体的方法。间接法成功的关键在于抗原的纯度。间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。
    (3)竞争法 竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被于固相。如抗原中有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质,然后再加入标本和酶标抗体进行竞争结合反应。小分子抗原或半抗原因缺乏可用于夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅。
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