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ABL2抗体

ABL2抗体

参考价格:¥1530.00
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详细说明

ABL2抗体
Recombinant Human Tissue Plasminogen Activator 100µg
Recombinant Human Triosephosphate Isomerase 1 25µg
Recombinant Human Thyroid Peroxidase 20µg
Recombinant Human Three Prime Repair Exonuclease 2 25µg
Recombinant E.Coli Thioredoxin Reductase 25µg
ABL2抗体Recombinant Yeast Thioredoxin Reductase 20µg
抗体/蛋白A或/蛋白G微珠层析柱的制备与常见问题:
蛋白A/蛋白G微珠—ABL2抗体层析柱是用于抗原的亲和纯化最为通用的粒柱基质之一(Gersten和Marchalonisl978,Schneideretal.1982,SimanisandLanel985)。此类层析柱容易制备,由于抗体分子是通过Fc功能区与基质结合,抗原结合位点的确切定向可与抗原最大限度地发生作用。以下介绍的是设计用于蛋白质抗原的纯化,但类似的方案也适用于其他任何抗原。
抗体可直接与蛋白A或蛋白G结合。根据抗体与蛋白A或蛋白G的亲和力,可以选用蛋白A或蛋白G微珠。一般推荐将蛋白A用于与小鼠单抗IsG2a、IgG2b和IgG3亚类连接,而将蛋白G用于IsGl。蛋白G用于与大鼠单抗连接,对于各种多克隆抗体,蛋白A适用于家兔、人、猪、脉鼠、狗或猫的样本,而蛋白G适用于小鼠、大鼠、绵羊、马、驴、牛或山羊的多克隆抗体。
一旦抗体与蛋白A或蛋白G微珠结合后,再通过双功能连接剂将其交叉连接到基质上。可以使用任何双功能连接剂,但大多数人使用二甲基庚二酸酯(DMP),因其价廉而且易于掌握。DMP的2种结合基团相同,都能与游离的氨基结合、由于碳分子骨架有很大的韧性,大多数抗体/蛋白A或蛋白G组合在合适的距离内存在反应位点,故能有效地结合。偶然不能有效结合,可以使用带有不同长度碳原子空隙的其他交连剂。
ABL2抗体常见问题
当抗体的游离氨基是与抗原结合的关键部位时,应用这种方法可能出现某些问题。此时,交连剂经常与抗原结合部位结合而阻断其与靶抗原的相互作用。
当偶联是成功的,并且在事先的工作中亦证明该抗体用于免疫沉淀是有效的,据此可以推断是由于偶联过程破坏了抗体与抗原结合的能力。出现这种情况时,可采用两种途径解决:使用较少量的交连剂以减少与抗原识别位点的作用,或者使用不依靠-NH2基团的其他双功能交连剂。上述方法可以先用小量的抗体与蛋白A或蛋白G结合进行试验,操作过程类似于下面将要介绍的方法。
值得注意的是,在使用此类亲和层析柱时,柱内没有与抗体交连的少量蛋白A和蛋白G分子与抗原制品中的无关抗体发生作用。因此,当此类层析柱用于纯化来自哺乳类动物抗原时,也可以纯化抗原制品中出现的抗体。这些问题是由于在纯化的抗原制品中混杂有重链和轻链多肽造成的。开始时应用不含有抗体的抗原制品进行纯化,或者是在抗原纯化之前或纯化后通过蛋白A或蛋白G层析柱去除制品中混杂的抗体,可以避免这类问题的发生。
有时结合反应不完全,这些可发生在由于DMP试剂贮存不当,或者是抗体制品中含有其他带有游离氨基的化合物。在检测结合效果时,上述步骤如发现少量的重链即说明有结合不完全,见步骤(7)。当出现这种情况时,先用100mmol/L甘氨酸(pH2.8)洗涤结合的微珠,可以去除任何非共价结合于蛋白A或蛋白G分子上的抗体。如果问题很严重,整个结合反应必须在设置对照的情况下重复进行,以发现问题出现的步骤。根据我们的经验,问题通常出现在使用贮存不当的DMP,或由于洗涤和结合缓冲液的pH值太低。
Recombinant Taq Plus DNA Polymerase 750U
Recombinant Taq DNA Polymerase 3,000U
Recombinant Human Tryptophan 2,3-Dioxygenase 5µg
Recombinant Human Tissue Transglutaminase 20µg
Recombinant Human Tissue Transglutaminase, Sf9 20µg
Recombinant Human Thiamine Triphosphatase 25µg
Recombinant Human Tissue Inhibitor of Metalloprotease 1 10µg
Recombinant Human Tissue Inhibitor of Metalloprotease 1, HEK 10µg
Recombinant Human Tissue Inhibitor of Metalloprotease 2 10µg
Recombinant Human DNA Topoisomerase-I 20µg
Recombinant Human DNA Topoisomerase-I 70kDa 20µg
Recombinant Human Tumor Protein p53 Inducible Protein 3 25µg