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β淀粉样肽1-42 (C端抗体)

β淀粉样肽1-42 (C端抗体)

参考价格:¥1530.00
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详细说明

β淀粉样肽1-42 (C端抗体)
Recombinant Human Protein-L-Isoaspartate O-Methyltransferase 5µg
Recombinant Human Phosphodiesterase 6D cGMP-Specific Rod Delta 5µg
Recombinant Human Protein Disulfide Isomerase 100µg
Recombinant Human Protein Disulfide Isomerase A3 5µg
Recombinant Human Protein Disulfide Isomerase A4 2µg
Recombinant Human Protein Disulfide Isomerase A6 5µg
β淀粉样肽1-42 (C端抗体)Recombinant Human Pyridoxal Phosphatase 2µg
Recombinant Human Peroxisomal D3,D2-Enoyl-CoA Isomerase 5µg
抗体/蛋白A或/蛋白G微珠层析柱的制备与常见问题:
蛋白A/蛋白G微珠—β淀粉样肽1-42 (C端抗体)层析柱是用于抗原的亲和纯化最为通用的粒柱基质之一(Gersten和Marchalonisl978,Schneideretal.1982,SimanisandLanel985)。此类层析柱容易制备,由于抗体分子是通过Fc功能区与基质结合,抗原结合位点的确切定向可与抗原最大限度地发生作用。以下介绍的是设计用于蛋白质抗原的纯化,但类似的方案也适用于其他任何抗原。
抗体可直接与蛋白A或蛋白G结合。根据抗体与蛋白A或蛋白G的亲和力,可以选用蛋白A或蛋白G微珠。一般推荐将蛋白A用于与小鼠单抗IsG2a、IgG2b和IgG3亚类连接,而将蛋白G用于IsGl。蛋白G用于与大鼠单抗连接,对于各种多克隆抗体,蛋白A适用于家兔、人、猪、脉鼠、狗或猫的样本,而蛋白G适用于小鼠、大鼠、绵羊、马、驴、牛或山羊的多克隆抗体。
一旦抗体与蛋白A或蛋白G微珠结合后,再通过双功能连接剂将其交叉连接到基质上。可以使用任何双功能连接剂,但大多数人使用二甲基庚二酸酯(DMP),因其价廉而且易于掌握。DMP的2种结合基团相同,都能与游离的氨基结合、由于碳分子骨架有很大的韧性,大多数抗体/蛋白A或蛋白G组合在合适的距离内存在反应位点,故能有效地结合。偶然不能有效结合,可以使用带有不同长度碳原子空隙的其他交连剂。
β淀粉样肽1-42 (C端抗体)常见问题
当抗体的游离氨基是与抗原结合的关键部位时,应用这种方法可能出现某些问题。此时,交连剂经常与抗原结合部位结合而阻断其与靶抗原的相互作用。
当偶联是成功的,并且在事先的工作中亦证明该抗体用于免疫沉淀是有效的,据此可以推断是由于偶联过程破坏了抗体与抗原结合的能力。出现这种情况时,可采用两种途径解决:使用较少量的交连剂以减少与抗原识别位点的作用,或者使用不依靠-NH2基团的其他双功能交连剂。上述方法可以先用小量的抗体与蛋白A或蛋白G结合进行试验,操作过程类似于下面将要介绍的方法。
值得注意的是,在使用此类亲和层析柱时,柱内没有与抗体交连的少量蛋白A和蛋白G分子与抗原制品中的无关抗体发生作用。因此,当此类层析柱用于纯化来自哺乳类动物抗原时,也可以纯化抗原制品中出现的抗体。这些问题是由于在纯化的抗原制品中混杂有重链和轻链多肽造成的。开始时应用不含有抗体的抗原制品进行纯化,或者是在抗原纯化之前或纯化后通过蛋白A或蛋白G层析柱去除制品中混杂的抗体,可以避免这类问题的发生。
有时结合反应不完全,这些可发生在由于DMP试剂贮存不当,或者是抗体制品中含有其他带有游离氨基的化合物。在检测结合效果时,上述步骤如发现少量的重链即说明有结合不完全,见步骤(7)。当出现这种情况时,先用100mmol/L甘氨酸(pH2.8)洗涤结合的微珠,可以去除任何非共价结合于蛋白A或蛋白G分子上的抗体。如果问题很严重,整个结合反应必须在设置对照的情况下重复进行,以发现问题出现的步骤。根据我们的经验,问题通常出现在使用贮存不当的DMP,或由于洗涤和结合缓冲液的pH值太低。
Recombinant Human Nudix Type Motif 16 5µg
Recombinant Human Nudix Type Motif 16 Like-1 5µg
Recombinant Human Nudix Type Motif 21 5µg
Recombinant Human 2’-5’ Oligoadenylate Synthetase 1 2µg
Recombinant Human 8-Oxoguanine DNA Glycosylase 5µg
Recombinant Human Ornithine Aminotransferase 5µg
Hyaluronidase 1,500IU
Recombinant Human Prolyl 4-Hydroxylase Beta 5µg
Recombinant Human Pregnancy-Associated Plasma Protein-1 2µg
Recombinant Human Poly (ADP-Ribose) Polymerase 1 5µg
Recombinant Human Pterin-4-Alpha-Carbinolamine Dehydratase 5µg